各种组织的cDNA文库以及定制服务

文库介绍

cDNA 文库(Complementary DNA Library)是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。cDNA 是便于克隆和大量 表达,它不像基因组含有内含子而难于表达,因此可以从 cDNA 文库中筛选到所需的目的 基因,并直接用于该目的基因的表达。

通过构建 cDNA 表达文库可以提供构建分子标记连锁图谱的所用探针 ,更重要的是可 以用于分离全长基因进而开展基因功能研究。因此,cDNA 文库在研究具体某类特定细胞中 基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方面具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞 分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值。

优尔生公司 cDNA 文库

构建方法:

优尔生构建 cDNA 文库是采用 Oligo(dT)作逆转录引物,给所合成的 cDNA 加上特异性设 计连接接头,连接到进行过优尔生公司改造后的 pUSCN 载体中获得文库。

USCN 文库质量标准:

1.插入 cDNA 片段>700bp;

2.文库容量(滴度)达到 10*6 次方;

3.随机选取 20 个转化后的克隆进行测序验证,判断是否是该物种的 cDNA;

图 1 随机挑取 23 个克隆 PCR 鉴定插入片段大小

PCR 使用 M13 引物,其中第 13 道为 200bp Marker,第 24 道为 1000bp Marker

现有文库:

人,小鼠,大鼠,猪,牛等物种的各个组织的普通文库;

目前提供的是一级文库(质粒是克隆质粒),可用于钓取基因,客户用于酵母双杂或其 他实验,是需要继续进行制备二级文库(用户需特殊声明)。

定制服务流程

服务内容:

1 客户样品 RNA 提取:Total RNA 的提取、mRNA 的分离;

2 双链的合成:第一链合成、 连接接头和第二链合成和扩增;

2 插入片段大小筛选 :对合成的 cDNA 双链进行长度筛选;

3 链接载体:将长度筛选的 cDNA 与 pUSCN 载体进行连接反应;

4 转化:将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞;

5 文库的质控:检测 cDNA 文库库容量以及每个文库随机挑取 20 个克隆子,PCR 检测 插入片段大小和插入率。

提供结果:

1 -20oC 保存的 cDNA 文库的甘油菌液;

2 文库构建报告:包括文库的库容,平均插入大小,重组率,cDNA 的完整性等等。