不需要客户设计引物、制备模板的基因克隆试剂盒
基因是进行分子生物学研究的主要对象,将基因片段构建上质粒的过程,通常被称之为目的基因的获取一般包 括引物设计、模板制备 PCR 扩增、目的片段回收、酶切与连接转化及最后的测序鉴定。整个过程一般需要两到三 周的时间才能完成。
同时,对于每个具体的基因片段来说,引物设计需考虑限制酶位点,还要防止由于出现发夹结构(Hairpin), 错误引发情况(False Priming),及上下游引物之间二聚体形成情况(Cross Dimer)而导致的扩增出目的带之外的杂 带和不出条带。PCR 过程则需要对退火温度和试剂配比体系进行反复的摸索和研究。不仅如此,用户还要自行提取 RNA 以及逆转录为相应的 cDNA 的复杂的模板制备工作。这些工作极大的阻碍了实验的进展,花费了科研人员的 大量精力。
Cloud-Clone Corp.公司为广大科研人员和从事制备重组蛋白的人员提供一套可用于目的基因的制备试剂盒 (Target Gene Clone Kit),我们的试剂盒为用户省去繁琐的引物设计与合成、模板获取的工作,PCR 条件摸索以及为 购买到各种合适的工具酶和进行引物合成的而耗去的宝贵的时间。用户只需提供目的基因的名称或者序列,按我们 的说明书进行实验,即可在 2 天内获取想要的基因片段。
Target Gene Clone Kit 提供了目的基因克隆的整个过程的配套试剂。
包括:从引物、模板、PCR Mix 和各种工具酶。
试剂盒组成成分:
模板:带目的基因的 cDNA 片段;
引物对:PCR 引物对,提供 1 OD(可供 50ul 体系 100 次试验);
PCR 预混 Mix: Buffer,dNTP,Mg2+ ;
工具酶:高保真 DNA 聚合酶,T4 连接酶;
以 Human IL-11 基因克隆试剂盒为例
1.实验操作信息
1.1 提供 PCR 引物对序列信息;
IL-11-Hu-上游:ATACGAATTCCCTGGGCCACCACCT
(长度 25bp;酶切位点:EcoRⅠ)
IL-11Hu-下游:CGCCAAGCTTTCACAGCCGAGTCTT
(长度:25bp;酶切位点:HindⅢ)
1.2 提供 PCR 退火温度;
PCR 产物长度 557bp;退火温度:56
1.3 提供试剂最佳的配比体系;
取灭过菌的 0.2ml PCR 管,参考如下表格设置反转录反应(50 μL 反应体系):
双蒸水 | 22μL |
2×Master PCR Mix | 25 μL |
上游引物 (10μM) | 1 μL |
下游引物 (10μM) | 1 μL |
模板 DNA | 1 μL |
总体积 | 50 μL |
1.4 提供扩增基因的序列信息;
CCTGGGCCACCACCTGGCCCCCCTCGAGTTTCCCCAGACCCTCGGGCCGAGCTGGACAGCAC
CGTGCTCCTGACCCGCTCTCTCCTGGCGGACACGCGGCAGCTGGCTGCACAGCTGAGGGACA
AATTCCCAGCTGACGGGGACCACAACCTGGATTCCCTGCCCACCCTGGCCATGAGTGCGGGG
GCACTGGGAGCTCTACAGCTCCCAGGTGTGCTGACAAGGCTGCGAGCGGACCTACTGTCCTA
CCTGCGGCACGTGCAGTGGCTGCGCCGGGCAGGTGGCTCTTCCCTGAAGACCCTGGAGCCCG
AGCTGGGCACCCTGCAGGCCCGACTGGACCGGCTGCTGCGCCGGCTGCAGCTCCTGATGTCC
CGCCTGGCCCTGCCCCAGCCACCCCCGGACCCGCCGGCGCCCCCGCTGGCGCCCCCCTCCTC
AGCCTGGGGGGGCATCAGGGCCGCCCACGCCATCCTGGGGGGGCTGCACCTGACACTTGACT
GGGCCGTGAGGGGACTGCTGCTGCTGAAGACTCGGCTGTGA
2.产品检测报告:
2.1.引物对合成检测报告;