NF-κB——癌症治疗新靶标之一

NF-κB(Nuclear Factor Kappa B)是一种转录因子,可通过不同的内外细胞 刺激,如细胞因子,无氧化剂自由基,紫外照射,细菌和病毒产品等激活。激 活后的 NF-κB 进入细胞核,激活生物学功能基因的广泛表达,已知在不同类型 的细胞中,在一定情况下超过 200 种基因以 NF-κB 为靶标。此外,NF-κB 对免 疫应答和炎症反应的调节,增殖,迁移,以及细胞凋亡都起重要作用。且越来 越多的现象表明 NF-kB 在肿瘤形成过程中扮演重要角色。已在许多人类的恶性 肿瘤中检测到 NF-kB 异常表达。近年来,许多研究都已集中在论证 NF-kB 激活 对信号转导机制的功能性影响,NF-kB 已成为癌症治疗的重要靶标。

Cloud-Clone Corp.公司针对这一研究热点,开发了一系列 NF-κB 的重组蛋 白和抗体以及 ELISA 定量检测试剂盒。NF-κB 相关产品的研制及面市,为广大 科研人员提供了系统的 NF-κB 研究工具体系。

下面简要介绍一下 NF-κB 相关产品的技术开发过程。

首先,将 NF-κB 基因扩增且双酶切后与 Cloud-Clone Corp.公司自主构建的 大肠杆菌表达载体 pUSCNK-1 进行连接。转化后经测序比对确定正确性后,将 表达质粒转化大肠杆菌,并经 IPTG 诱导表达,因表达蛋白含有 His 标签,采 用镍柱纯化,获得不同种属的 NF-κB 重组蛋白(RPB824Hu01, RPB824Hu02,  RPB824Mu01, RPB824Ra01, RPB824Ga01),并做 SDS-PAGE 验证蛋白的分子量 以及纯度。图 2 是 RPB824Hu02 的 SDS-PAGE 验证图。

其次,分别用重组蛋白免疫小鼠,纯化后制备出小鼠抗人(MAB824Hu22), 小鼠抗大鼠(MAB824Ra21),小鼠抗鸡(MAB824Ga21)的 NF-κB 高特异性单 克隆抗体。

最后,用不同种属重组蛋白免疫家兔,获得兔抗人(PAB824Hu01, PAB824Hu02),兔抗小鼠(PAB824Mu01),兔抗大鼠(PAB824Ra01)和兔抗鸡 (PAB824Ga01)的 NF-κB 多克隆抗体。将获得的多克隆抗体与生物素偶联得到 (PAB824Hu71, PAB824Mu71) 偶联抗体。将获得的多克隆抗体与 FITC 偶联得到 (PAB824Hu81, PAB824Mu81)。这些抗体都通过了 Western Blot 和 IHC 等方法 的验证。用 PAB824Hu01 对血清样本进行 WB 检测,结果如图 3 所示。用人心 脏组织进行 IHC 检测结果展示于图 4 中,结果显示在人心脏组织中该蛋白主要 集中表达于细胞质与细胞核中。

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