内参蛋白抗体介绍I
Western Blot 是一种常用的初步检测基因表达产物正确与否的实验方法，同时 它也多用于比较不同样本中蛋白表达量的差异。但是由于 Western Blot 是一种包含 多个实验步骤和多种试剂的系统实验，所以当遇到结果与预期不同的情况时，特别 是：全阴性结果，假阳性结果时，对于这类结果出现的原因进行分析也是十分繁琐 的一件事情。基于此，一个严谨的 Western Blot 实验一般都需要设计一种合适的参 照体系，这样便于对实验结果进行分析。常见的参照体系包括多种参照物，例如： 分子量 marker，空白载体对照，阴、阳性对照样本，内参等等，其中内参在结果 分析中起到至关重要的作用。
内参（Internal Control）是指试验系统的内部参照，一般对于哺乳动物细胞表 达系统来说是指由看家基因（house keeping gene）编码表达的蛋白，他们在各种不 同组织和细胞中的表达都相对恒定，在实验中检测蛋白表达水平时，将该蛋白作为 一种参照物，可用于确定样本使用量（组织量，细胞量，上样量等）的一致性，以 及校正实验过程中可能出现的操作误差，以进一步保证实验结果的准确性。所以在 展示 Western Blot 实验结果时，内参数据的提供是十分重要的。
现在实验中常用的内参蛋白包括：细胞骨架蛋白 beta-actin，beta-tubulin， GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）等。一般为了便于分辨目的蛋 白分子和内参，建议这两者间的分子量相差大于 5kD。
Actin 是肌动蛋白，一种重要的细胞骨架蛋白，他共分为 6 种亚型，包括： alpha-skeletal muscle actin、alpha-cardiac muscle actin、alpha-smooth muscle actin 和 gamma-smooth muscle actin、beta-actin (β-non-muscle)和 gamma-non-muscle actin， 其中前 4 种是组织特异性的，而后两种广泛分布于各种组织中。但是常用作 Western Blot 内参的 beta-actin（分子量约 42kd）实际上在肌肉组织中的分布很少，所以如 果选用 beta-actin 特异性的肽段（如：N-端肽段）作为免疫原制备的抗体可能在肌 肉组织中就不能得到阳性信号，而用 beta-actin 中与其他 actin 序列同源性高的肽段 作为免疫原制备的抗体就能在包括肌肉组织在内的多种组织中检测到阳性信号，而 可作为一种广泛可用的内参对照。与 abcam 和 sigma 常用的 N 段或者 C 端肽段制 备抗体不同的是，Cloud-Clone Corp.制备的 beta-actin 内参抗体 PAB340Mi 是基于 该蛋白的全长序列的，经过 Western Blot 显示：该抗体可以识别包括心肌组织在内 的多种组织中的 beta-actin，同时由于该蛋白在不同物种中的高度保守性，所以可 用于多物种样本的内参蛋白识别。
图 1 PAB340Mi 使用于不同组织中的 Western Blot 图
Tubulin 即微管蛋白，同样是一种重要的细胞骨架蛋白。Tubulin 分为 alpha、 beta、gamma、delta，epsilon 等多种亚型，由于其中的 beta-tubulin（分子量约 50kd） 具有与 beta-actin 类似的特点，所以也多用作 Western Blot 内参，Cloud-Clone Corp. 制备的 beta-tubulin 内参抗体 PAB870Mi01 同样可作为多物种样本的内参抗体用于 Western Blot 实验中。
GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，是参与糖酵解的一种关键酶，其分子量约 36kd，也是一种常用的内参蛋白，Cloud-Clone Corp.研发的该内参抗体 PAB932Hu01 lane 10 kidney lane 11 spleen lane 12 liver lane 13 lung lane 14 brain lane 15 heart 和 PAB932Hu02，其免疫原分别为含有 Gly2~Ser148 和 Thr154~Val324 两段序列的 重组蛋白，均可以用作 Western Blot 实验中的内参抗体。使用该蛋白作为内参时还 需注意一点：由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致 GAPDH 的表达增高，在使用该 类组织细胞样本时，不适合使用 GAPDH 做为内参。
而针对细胞核内参，Cloud-Clone Corp.也研发制备了抗组蛋白 Histone H3 和增 殖细胞核抗原 PCNA 的抗体，PAA285Mi01 是针对染色体组成型表达的 H3 蛋白的 特异性抗体，PAA591Mi01 是针对细胞核内合成的 PCNA 蛋白的抗体，已被多位研 究工作者用作核内参抗体。
更多相关产品请登录 http://www.cloud-clone.us/。