如何使用抗体对产品?

对于免疫检测试剂盒生产商、诊断试剂厂商和大量使用检测试剂的药厂来说,最大的困扰莫过于检测试剂原料的限制了,随着云克隆抗体对产品全线面市,这一难题迎刃而解。有了优质的抗体对,就能够制备高效的免疫检测试剂盒,包括双抗夹心酶联免疫检测,化学发光免疫检测,酶联免疫斑点检测,液态芯片分析系统和免疫层析法等。

下面我们详细介绍一下云克隆抗体对产品试剂组成,见表一,并以两种抗体对最常用的应用——双抗夹心ELISA和免疫层析(胶体金)为例来介绍该类产品的使用方法。

云克隆抗体对产品试剂组成:
标准品:目的蛋白;
包被抗体:单/多克隆抗体;
检测抗体:(生物素标记的)单/多克隆抗体。 


                        表1. 抗体对产品试剂组成

1.双抗夹心ELISA:

1.1. 酶标板包被抗体流程:

1.1.1按说明书推荐的比例稀释包被抗体,或者设计预实验用倍比稀释的方式稀释包被抗体,酶标孔中加100ul包被抗体包被。酶标板加上覆膜,4oC温育过夜或37oC温育2小时。

1.1.2弃去孔内液体,每孔用350μL的洗涤液洗涤,浸泡1-2分钟。在吸水纸上轻拍酶标板来移除孔内所有液体。此过程也可采用喷射瓶,多道移液器 或自动洗板机来完成。

1.1.3每孔加入200ul封闭液封闭,37oC温育1.5小时。

1.1.4 弃去孔内液体,甩干,洗板1次,方法同步骤1.1.2。酶标板包被抗体完成。

1.2. 实验流程

1.2.1按说明书推荐的方法稀释成不同浓度的标准品工作液,或设计预实验设定倍比稀释的多个标准品工作液。酶标板中依次加入100μL不同浓度的标准品,空白孔加100μL标准品稀释液,余孔加待测样品100μL,酶标板加上覆膜,37oC温育1小时。

1.2.2 弃去孔内液体,甩干,洗板1次,方法同步骤1.1.2。

1.2.3 按说明书推荐的稀释倍数或使用多个不同稀释倍数稀释检测抗体(生物素标记的单/多克隆抗体),酶标板中每孔加入100μL稀释后的检测抗体,酶标板加上覆膜,37oC温育1小时。

1.2.4 此后实验方法与常规ELISA实验同。

2.免疫层析(胶体金):

2.1 胶体金标记抗体的制备。将检测抗体加入到胶体金溶液中,搅拌均匀,静置0.5-24小时,逐滴加入牛血清蛋白,搅拌0.5-24h,静置过夜。离心,弃去上清液。得到胶体金标记抗体。

2.2 喷金。将胶体金标记抗体喷在结合垫上,37oC抽风烘干5-24h,得到喷金后的结合垫。

2.3包被C线。C线即是质控线,用二抗包被。

2.4包被T线。T线是检测线,用包被抗体包被。37oC抽风烘干2-24h, 得到包被后的硝酸纤维素膜,浸泡在封闭液中,37oC抽风烘干2-24h。

2.5 组装。将聚氯乙烯底板、样品垫、步骤2.2所得喷金后的结合垫、步骤2.3&2.4处理好的硝酸纤维素膜和吸水纸组装,切割成条,得到胶体金免疫层析快速检测试纸条;


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