Real Time qPCR您身边的基因转录实时监控专家

基因作为生物体最为重要的信息载体,储存着生物体全部的遗传信息,决定着生物的性状、分类、生命周期等各种特征,然而基因往往不直接参与生命活动的调控。对于高等生物,在满足中心法则原则的情况下,基因(DNA)通过转录形成RNA,一些RNA通过特定的方式翻译形成蛋白质,而蛋白质才是直接参与生物性状决定的最主要物质。RNA作为联系基因和蛋白的重要桥梁基因信息的翻译以及调控基因转录、核酸剪切等多方面的具有重要作用,这也使得对于RNA研究和检测显得尤为重要。

RNA检测其实对于我们每个人不陌生,前段时间令人闻风丧胆的禽流感病毒乙型肝炎病毒复制度检测。天然状态的RNA常为单链,结构不稳定,容易被RNA酶降解,需要在逆转录酶的作用下转化形成更为稳定的cDNA,以方便检测。目前cDNA定量检测方式主要以Real Time qPCR染料法和Real Time qPCR探针法为主。

Real Time qPCR染料法(如图1所示)采用一种能与DNA特殊结合的荧光染料SYBR GreenSYBR Green属于一种结构扁平的化学小分子,具有微弱的荧光,能够特异性与DNA的小沟结合并发出强荧光,荧光的强度与体系中DNA的含量成正比。染料法具有操作简单、价格便宜等诸多优点,但是也存在由于荧光染料能与所有的DNA结合而引起的特异性不强、只能相对于内参进行相对定量等缺点,这也决定了染料法通常仅限于实验室使用,而在医学诊断中使用有限。

             

Real Time qPCR探针法(如图2所示)需要人工合成带有发光基团R和淬灭基团P(常采用MGB修饰)的单链DNA探针以及一对特异性的PCR引物。单链DNA探针需特异性的识别和结合cDNA预扩增区域。当发光基团和淬灭基团与DNA探针结合完好时,反应体系将不具有荧光,而在PCR的过程中,由于Taq酶具有5′-3′外切酶活性(此活性是双链特异性的,游离的单链探针不受影响)将会使与cDNA结合探针5′端的发光基团游离出来发出荧光,荧光的强度与复制的次数成正比。探针法虽然存在操作较复杂、价格偏高、探针设计和标记复杂等方面的不足之处,但是具有特异性强,测值稳定,能够完全定量等一系列的特点使得探针法能在医学诊断中被广使用。

            

Cloud-Clone Corp.长期为客户提供Real Time qPCR检测服务,在引物和探针设计、合成方面积累大量的经验。同时配套有动物模型和细胞实验服务,为客户提供更为全面的一站式服务体验。

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