免疫组织化学石蜡切片实验操作流程
1. 烘片：60℃烘片0.5-2小时。
2. 脱蜡水化：烘片结束后，石蜡切片依次置于以下试剂中：
1）二甲苯I：30 min
2）二甲苯II：30 min
3）100%乙醇：10 min
4）95%乙醇：10 min
5）80%乙醇：10 min
6）70%乙醇：10 min
7）自来水冲洗10 min
3. 抗原修复-微波炉抗原热修复法（可选）：将组织切片转移到沸腾的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加热一分钟，停止加热并静置于微波炉中10min。然后再低火加热3-4分钟，停止加热，使EDTA-Tris 溶液在室温自然冷却。
4. PBST漂洗3次：去除残留并浸泡在PBST中，在摇床中以40 RPM漂洗5 min，重复3次。
5. 阻断内源过氧化物酶：用3%-5% H2O2室温孵育10min。
6. PBST漂洗3次：去除残留并浸泡在PBST中，在摇床中以40 RPM漂洗5 min，重复3次。
7. 封闭：去除残留，用5%BSA室温孵育20 min。
8. 孵育一抗：去除残留，用已稀释至工作液的一抗4℃孵育过夜（推荐使用）或37℃孵育60min。
9. 复温：将切片从4℃移至室温静置约需20min。
10. PBST漂洗3次：去除残留并浸泡在PBST中，在摇床中以40 RPM漂洗5 min，重复3次。
11. 孵育HRP标记的二抗：去除残留物，用已稀释至工作液的二抗4℃孵育60min。
12. PBST漂洗3次：去除残留物并浸泡在PBST中，在摇床中以40 RPM冲洗5 min，重复3次。
13. 显色：使用DBA试剂盒（Cat # IS046）进行组织切片的显色。按照说明书混合试剂A和B，在切片上滴加适量新鲜配制的DBA溶液，室温孵育0.5~10min，直到出现棕色，用蒸馏水终止显色并清洗切片。
14. 苏木精复染，然后将组织切片晾干，滴上树脂，用盖玻片盖住组织部分，在显微镜下观察。