免疫组织化学——样本处理方法
免疫组织化学用于观察标本的染色结果对靶抗原抗体进行鉴定和定位，其标本制备非常重要。在制作标本过程中，需保持抗原的完整性，在染色、洗涤包埋等过程中避免发生溶解和变性，同时防止扩散至邻近细胞或组织间隙中。
组织材料的处理是获得良好免疫组织化学结果的前提，活体组织，各种体液及穿刺液和细胞都可以用于免疫组化分析，针对不同的标本类型可以选择不同的制备方法。活体组织常选用石蜡切片和冰冻切片处理，而体液、穿刺液及细胞样本则选用涂片方式处理。对于细菌菌落或尸体病变组织，可将新鲜切面压印于玻片上做成印片。我们主要介绍活体组织样本常用的组织学制片技术，冰冻切片和石蜡切片。
一、冰冻切片
1. 取材，取新鲜组织，切成小块，厚度为2mm。
2. 速冻， 将组织块平放于洁净的小盒内， 加入OCT包埋剂浸泡组织后，入液氮速冻大约10～20s迅速冰冻成块，如需保存，应置于-80℃存储备用。
3. 固定， 将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
4. 切片， 将冷冻切片机置于低温密闭室内，连续切薄片5～10um。切片的厚度根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切。不同组织也许调整选择不同冷冻度。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10～ -15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～-20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃。
二、石蜡切片
1. 取材，选择所需要的观察的部位，切成小块2～3mm厚。
2. 固定，用生理盐水清洗肝组织，浸泡于中性福尔马林固定液中固定30-50min。
3. 脱水，将组织放置于梯度浓度的酒精中脱水。
50%酒精 (0.5h) ————> 70%酒精 (0.5h) ————> 80%酒精 (0.5h) ————> 95%酒精 (0.5h) ————> 100%酒精 (0.5h) ————> 100%酒精 (0.5h)
4. 透明，脱水后，将组织浸泡三级透明液，处理后，组织块显现透明状态。
1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) ————> 纯二甲苯 (1.5h) ————> 纯二甲苯 (1.5h)
5. 浸蜡，透明处理后，将组织置于1/2二甲苯+1/2无水乙醇溶液中，40℃恒温箱放置40min，放入石蜡I 30min,石蜡II 40min以除去组织中的透明剂。浸蜡需在恒温箱中进行，时间根据组织大小而定。
6. 包埋，调节恒温箱温度至60℃，换纯蜡3次，每次1～2h,
7. 切片，将已固定和修好的石蜡块装在切片机上，切片厚度为4～10um.完成后，可置于纤维镜下观察切片是否良好。
8. 粘片，在洁净的载玻片上涂上粘片剂，后滴加载玻片上滴加数滴蒸馏水，将组织切片粘上去，将载玻片置于35℃烫板上，倾斜或用吸水纸除去水分后，在烫板上晾干。