云克隆抗体anti-mouse IRF4在Blood发表！

文章题目： 肿瘤特异性T细胞不能根除淋巴瘤的起始B细胞！

要点: 1. 在新构建的小鼠模型中，肿瘤特异性T细胞缺失会增加B细胞淋巴瘤的发生率；

2. 淋巴瘤的起始B细胞不能被免疫系统清除，使得依然有进展成淋巴瘤的风险。

那么，让我们一起来看一下作者是怎么进行论证的！

第一步，建立B细胞淋巴瘤。

将未成年的携带TAg的LoxP-Tag小鼠分别和CD19-Cre或CD19-CreER^T2小鼠杂交，通过Cre/loxP介导的重组酶，TAg在B细胞系中特异性表达的开关被开启。在CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠中，Cre重组酶的活性是持续性表达的，而CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠中的Cre重组酶的活性依赖于外源性的他莫昔芬。借助RFP荧光小鼠，分析了两种Cre重组酶的重组率，结果显示CD19-Cre较高。但以上验证仅是一种推断，因为TAg和RFP转基因插入的是不同的基因位点。为了评估CD19-Cre x LoxP-Tag和CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠产生的TAg对特异性CD8⁺ T细胞应答的能力，进行了四聚体技术分析和细胞胞毒实验，结果表明CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠的CD8⁺ T细胞TAg耐受，如图所示：

第二步，验证CD19-Cre x LoxP-Tag而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠易发展成B细胞淋巴瘤。

根据第一步的结果我们很容易推断，CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠易发展成B细胞淋巴瘤，而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠。那么，作者从哪些方面进行了验证呢？

通过比较CD19-Cre x LoxP-Tag和他莫昔芬诱导的CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠在B细胞淋巴瘤生存率和脾、淋巴结组织化学染色以及流式细胞分析脾细胞B细胞谱系标志物和TAg表达情况。

结果显示CD19-Cre x LoxP-Tag而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠易发展成B细胞淋巴瘤并且生存率更低。其B细胞淋巴瘤生存率统计结果如图：

B细胞淋巴瘤生发中心标志物检测阴性——该B细胞淋巴瘤为生发中心外B细胞起源

第三步，验证体外注射TAg⁺ B细胞是否具有致瘤性和免疫原性。

分别将携带淋巴瘤的CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠和无肿瘤LoxP-Tag对照同窝小鼠的1 x 10⁶个脾细胞静脉内注射到Rag^{- / -} 小鼠体内。从生存曲线和脾脏大小进行评估的结果如下图：

以上结果说明，体外注射 TAg⁺ B细胞具有致瘤性和免疫原性。

第四步，验证在TAg特异性T细胞缺失的情况下，淋巴瘤的发病率增加。

分别将CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag和CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠的B细胞或脾细胞静脉注射到Rag^{- / -} 小鼠。比较CD19⁺ TAg⁺淋巴细胞百分比、生存率、B细胞淋巴瘤TAg⁺百分比，可得到结论：在TAg特异性T细胞缺失的情况下，淋巴瘤的发病率增加。

接下来分析内源性TAg特异性CD8⁺ T细胞的应答反应。

为了排除内源性TAg特异性CD8⁺ T细胞对实验的影响，比较LoxP-Tag和CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠的T细胞应答情况并无显著性差异，进一步通过细胞胞毒实验证实TAg特异性的CTL应答。

最后确定，TAg特异性T细胞不能根除淋巴瘤起始B细胞。

在淋巴瘤发展过程中，可以发现经过他莫昔芬诱导的CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag所有的小鼠的血细胞中均能检测到TAg mRNA。

在致癌基因诱导前一周，用TAg⁺的癌细胞免疫小鼠，结果表明尽管诱导了免疫应答，但仍未能清除TAg起始B细胞，如下图所示：

该结论也进一步在脾、骨髓和腹膜腔中得到了证实。

迄今为止，对B细胞淋巴瘤与T细胞之间的相互作用知之甚少。研究者通过建立转基因小鼠模型，诱导B细胞特异性的癌基因——SV40 T抗原（TAg）表达，研究肿瘤特异性T细胞在自发性B细胞淋巴瘤发展中的作用。

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