蛋白活性实验-SOD3活性蛋白
实验原理
Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)，是SOD同工酶的一种。SOD3以Cu2+、Zn2+为辅基，属于CuZn SOD，可以消除体内代谢产生的反应氧族，抵御内外环境中超氧离子的损伤。由于超氧阴离子自由基O2 - 寿命短，不稳定，不易直接测定SOD活性，而采用间接的方法。本实验采用邻苯三酚自氧化法来间接测定，SOD的活性。邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，生成有色中间产物，在325nm下吸光值增加，加入SOD酶后能抑制其自氧化的速率，从而间接测定SOD酶的活性。
实验试剂及仪器
试剂：50mmol/L Tris-HCl，pH8.2
50mmol/L 邻苯三酚，用10 mmol/L的HCl 溶解，避光
仪器：岛津UV1800紫外分光光度计
实验步骤
在25℃下，将900μl 50mmol/L Tris-HCl的缓冲液中加入30μl 50mmol/L 邻苯三酚，迅速摇匀，以Tris-HCl的缓冲液为空白对照，在325nm下每隔30s测定一次OD值，共测6次，要求自氧化速率控制在0.070 OD/min。（比色皿的光经为25px,可根据调整加入邻苯三酚的体积来控制其自氧化速率）。调整好自氧化速率后，在900μl 50mmol/L Tris-HCl的缓冲液中加入一定量待测重组SOD酶液，预热20min后，加入30μl 50mmol/L 邻苯三酚，迅速摇匀，在325nm下每隔30s测定一次OD值，共测6次。在此条件下，每分钟抑制邻苯三酚自氧化率50%的酶量定义为一个活力单位U。
结果计算
A325/min为SOD抑制邻苯三酚的自氧化速率；
0.93为反应总体积；
V为加入待测酶液体积；
N为样品稀释倍数。
实验结果
SOD单位活力（U/mg）=SOD单位活力（U/ml）/1ml酶液所含蛋白的量
重组人SOD3酶活为：121.4U/mg
重组小鼠SOD3酶活为：273.8U/mg