云克隆HRP-SA质量可与Thermo产品媲美

HRP-SA即辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(SA),由HRPSA交联形成,常被作为信号放大器用于生物素化分子的检测,包括生物素化核酸、蛋白、抗体等,可提高检测灵敏性。

SA是一个四聚体蛋白,由4条相同的肽链组成,分子量为52.8kDa1SA可以高度特异地与4个生物素(Biotin)结合。SA与鸡蛋清来源的亲和素(Avidin)相比,非特异性结合低很多,这是由于SA不含糖基且等电点接近中性。因为SA具有比Avidin低的非特异性背景,故而应用更为广泛。

HRP稳定、分子量小、容易制备,当它与底物孵育时,能产生一种着色、荧光或发光标记的分子衍生物,因此被广泛应用于分子生物学、生物化学、免疫学等领域的检测。

目前,云克隆建立了成熟的原核发酵技术,可进行高纯度(95%SA的大量生产。同时,结合已有的HRP交联技术平台,我们已完成HRP-SA的工业化批量生产。HRP-SA可以在两个领域内大量应用,一是作为体外诊断(IVD)试剂信号放大系统的通用试剂,二是作为科研试剂(ELISAWBIHCSouthern等)的显色系统中信号放大系统的通用试剂。

针对SA的活性,我们通过Green改良法进行了活性检测,并和其他来源的SA活性进行了比较,结果如下:

对于交联后的HRP-SA的稳定性及在各种实验中的表现,检测数据展示如下:

1)稳定性检测

     将即用型HRP-SA37度分别放置0天、3天和7天,使用GAPDH成品检测试剂盒(货号:SEB932Hu)进行ELISA检测,结果如下:


2IHC检测

对人乳房组织进行微波抗原修复预处理,接着加入浓度为5µg/mlPCNA抗体(货号:CAA591Hu22)进行孵育。孵育后添加1µg/ml生物素标记山羊抗鼠二抗(货号:SAA544Mu17),紧随其后加入1µg/mlHRP-SA。采用DAB作为显色剂,组织切片用苏木精复染,用树脂封闭后镜检,结果如下:

3ELISA检测

板底预包被抗OVA抗体(货号:MAB459Ge21)浓度为2µg/ml,添加OVA,初始浓度为50ng/ml,依次倍比稀释。稍后添加1µg/ml Biotin标记的抗OVA抗体(货号:LAB459Ge71)。最后添加1µg/mlHRP-SA进行显色读数,结果如下:

 

完成这些基本检测后,我们还将不同厂家的HRP-SAELISA实验中的表现进行了对比。

1)使用GAPDH成品检测试剂盒(货号:SEB932Hu)中除检测液B外的其他试剂和3种不同来源的HRP-SA进行ELISA检测,结果如下:


2)任选了10个不同指标成品检测试剂盒中的除检测液B外的其他试剂和2不同来源的HRP-SA进行ELISA检测,结果如下:

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