基质金属蛋白酶13活性实验
基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinase）是一组具有多种共同生化性质的可以降解细胞外基质的酶，它们参与正常生命过程中结缔组织的再造。基质金属蛋白酶的降解作用在中性pH条件进行，需要有内在的Zn2+离子和外在的Ca2+离子存在；且酶活能被螯合剂和金属蛋白酶的组织抑制因子（Tissue Inhinbitor of Metalloproteinase，TIMP）所抑制。 基质金属蛋白酶13（MMP13）是基质金属蛋白酶家族的成员，研究表明MMP13参与与骨关节炎相关的聚集蛋白聚糖降解，骨关节炎软骨移植物中II型胶原蛋白的裂解，以及肿瘤的进展和转移。另外，MMP13还可以切割I，III，IV，IX，X和XIV型胶原蛋白和纤连蛋白。MMP13在细胞外基质降解和细胞-基质相互作用的调节中起关键作用。 我们使用明胶酶谱法检测了MMP13的活性。具体步骤如下： 1.制备不同浓度的MMP13，1000ng，500ng，250ng，125ng； 2.向不同浓度的MMP13中加入用SDS上样缓冲液； 3.在非还原条件下，将不同浓度的MMP13和阴性对照（热变性的MMP13）上样电泳，使用含明胶（1mg / mL）的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE，10％凝胶）； 4.复性，孵育，CCB染色。 结果：活性MMP13会水解凝胶中的明胶，由凝胶上的白色条带指示。 重组MMP13的明胶水解如图1所示。
实验所使用的MMP13活性蛋白：APA099Hu01，Cloud-Clone。