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大肠杆菌无细胞表达系统
查看详情传统的大肠杆菌表达系统经过不断的改进优化，具有生产周期短、效率高、成本低等一系列的优点，但是也存在系统自身的缺陷性，除了无法完成真核蛋白的折叠与修饰外，至今人们利用该系统仍无法解决膜蛋白以及一些毒性蛋白表达，严重制约着大肠杆菌表达系统的应用。为弥补原核表达系统的不足，人们常用真核表达系统来表达重组蛋白，但是真核表达系统步骤繁琐、周期长、蛋白产量低、费用高等一系列问题，也给真核表达系统的推广应用设置了一个比较高的门槛。目前，随着人们对蛋白表达系统研究的不断深入，使得蛋白的无细胞表达从可能变成......
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ELISA试剂盒精密度性能分析
查看详情精密度，表示在相同条件下，同一样本的重复测定值之间的符合程度，作为检测系统的基本分析性能之一，是评判检测系统有效性的评价基础。那么，如何测定检测ELISA试剂盒的精密度呢？ELISA试剂盒的精密度分为批内精密度和批间精密度。精密度用样品测定值的变异系数CV表示。。批内精密度：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值（Mean）及SD值。计算公式如下：批间精密度：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重......
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CRISPR/Cas9和Argonaute基因编辑技术简介
查看详情随着科学技术的发展，人们对疾病认识的进一步深入，发现人类很多疾病的发病原因与基因突变有着密不可分的关系。那么如何去治疗这些疾病呢？人们自然想到了采用一些技术手段对突变的基因序列进行重新编辑，以期达到治愈的目的，这项技术就是基因编辑技术。基因编辑技术经过了以归巢酶，ZFN，TALEN等以蛋白质与DNA识别与切割为原理的第一代基因编辑技术的发展，人们对基因编辑技术的认识不断加深，但是由于第一代基因编辑技术操作步骤繁琐、基因编辑效率低下、基因编辑脱靶现象严重等问题，很难应用于生产实践。2003年，MIT小组首次利......
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磁珠化学发光双抗夹心酶免疫测定法检测原理
查看详情磁珠化学发光酶免疫测定，是集磁珠分离技术，灵敏的化学发光分析和特异的抗原抗体免疫测值与一体的检测技术。其中磁珠化学发光双抗夹心酶免疫测定法用酶标记抗体，代测标本中目的抗原，以及磁颗粒抗体形成夹心结构，通过磁场把结合状态（复合物：酶标记抗体+目的抗原+磁颗粒抗体）和游离状态的非目的物以及酶标记抗体分离开，加入发光底物进行发光反应，通过对发光强度的检测进行定量或定性测定。此技术属于酶免疫测定的一种。区别于酶联免疫定量检测试剂盒，最后一步酶反应所用的底物为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上......
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ERK5信号通路
查看详情前期专题我们介绍了MAPK级联激活通路，主要包括细胞外信号调控的蛋白激酶（ERK）、c- Jun N端激酶（JNK）、P38MAPK以及ERK5 四条途径，后3条均属于应激激活MAPK通路，其中ERK5通路作为一种非典型的 MAPK 通路，它的发现是比较晚的，但是研究却很活跃。ERK5 由 816 个氨基酸构成，长度几乎是其他 MAPK 家族成员的 2 倍。ERK5 的N 末端包含有蛋白激酶区， C末端有一个独特的 COOH，这有别于 MAPK 家族的其他成员，如图1是ERK5的三维结构。ERK5 的级联反应也是由 3 个相应顺序激活: 各种刺激因素激活 MEKK2 /3，再由 MEKK2 /3激活MEK5......
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酸性 α- 葡萄糖苷酶-庞贝病的诊断金标准
查看详情酸性α- 葡萄糖苷酶 (Glucosidase Alpha, Acid, GaA)，为淀粉水解酶类的一种。它能催化多糖水解，产生α- D-葡萄糖。同时它也具有转糖苷作用，可将低聚糖中的α-1，4-糖苷键转化成α-1，6-糖苷键或其他形式的链接，从而得到非发酵性的低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等。当位于第17号染色体上编码酸性α-葡糖苷酶的基因突变，造成体内酸性α- 葡萄糖苷酶缺乏，糖原无法正常代谢，导致体内糖原在骨骼肌、心肌和平滑肌等肌肉组织内大量集聚，导致严重的神经肌肉病变。这种溶酶体贮积症，被称为庞贝病，也称为酸性α -葡糖苷酶缺乏症或II型糖原贮积......
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补体C3在血清血浆中的检测及应用
查看详情补体（Complement）主要分布在人和动物的体液和细胞表面，活化后有生物活性，并可介导免疫和炎症反应的一组蛋白质，又称为补体系统。补体系统由近40种成分组成，大部分都是糖蛋白。补体的固有成分有13类，调节蛋白有10类；补体受体10多种。补体不耐热，当温度达到56度，时间达到30分钟时大部分补体会失活。补体不易保存，冷冻干燥，保存时间相对长一些。补体第三组分（Complement Component 3，C3）是补体的核心成分，分子量为195000，由19号染色体C3基因编码。C3是血液中含量最大的补体成分，主要由巨噬细胞和肝脏合成。C3在补体经......
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MAPK级联激活信号通路
查看详情丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一组能被不同的细胞外刺激，如细胞因子、神经递质、激素、细胞应激及细胞黏附等激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。MAPK信号通路是利用逐级磷酸化过程将信号放大传至细胞核内，调节转录因子的活性，调控相应基因的表达，进而引起细胞反应的一类重要信号系统。MAPK级联激活是多种信号通路的中心，参与到细胞的分裂、分化、凋亡等多种生命过程，且在一些骨关节组织炎症，癌细胞转移等病症中发挥关键性作用。MAPK信号转导是以3 级激酶级联激活的方式进行的，如图所示，首先M......