• 流式细胞术(FCM)常见问题及解答

    FCM是利用流式细胞仪对处在快速直线流动状态中的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参数、快速的定性、定量分析或分析技术。然而,在FCM的实际应用过程中,要想得到高质量的流式数据却并非易事。现就FCM实验中的常见问题进行分析,希望能帮助相关实验人员提高实验成功率。1. 怎么选择合适的对照?1)同型对照:使用同型抗体做平行实验,主要目的是消除抗体与样本的非特异性结合。2)阴性细胞对照:使用已知的不表达目标抗原的细胞做平行实验,主要目的是消除抗体的非特异性结合。3)二抗对照:第二抗体多为荧光标记的多抗,非特异性结......

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  • ELISA实验样本测值低原因分析和建议解决方案

    ELISA实验样本测值低原因分析和建议解决方案ELISA 实验中,实验者经常会遇到样本测值低的问题,针对这一问题,分析了可能原因和解决方法。分析原因解决方法试剂盒保存不当,导致试剂部分或完全失效。请按说明书要求保存试剂盒。检测液 A、检测液 B、标准品以及酶标条等储存在-20 oC,而其它试剂需储存在 4 oC。样本反复冻融,样本反复冻融会导致样本中蛋白降解。收集样本制备后,需进行分装后冻存-20oC或-80oC,避免样本反复冻融。样本保存不当或保存时间过长。长时间的储存有可能导致目标蛋白的降解, 致使检测结果不理想。建议使......

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  • 蛋白质印迹(WB)常见问题及解答

    蛋白质印迹(Western Blot)是根据抗原抗体特异性结合的原理检测复杂样本中的某种蛋白的方法。将混合抗原样本在凝胶板上进行单向或双向电泳,经过 PAGE 分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与或标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应用于鉴定蛋白以及对蛋白进行定性和半定量分析。蛋白质印迹分为蛋白质分离、......

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  • 免疫组织化学(IHC)常见问题及解答

    免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术,是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性和分子生物技术的敏感性等巧妙结合,借助显微镜的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等),是单一的静止的形态学描述,上升到结构、功能和代谢为一体的动态观察,为疾病的诊断、鉴别诊断和发病机制的研究提供了强有力的手段。然而,要想得到一张高质......

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  • 酶联免疫吸附测定实验(ELISA)实验常见问题及解答

    在酶联免疫吸附测定实验中,每一个步骤或环节都需要操作者严格控制实验条件,否则可能会影响到最终结果。现就试验中遇到得常见问题进行分析总结,给进一步给出解决方案,希望能为帮助相关实验人员提供实验成功率。问题可能原因解决方案标准曲线差标准品准备不正确进行正确的标准品梯度稀释吸取及洗涤不充分充分的吸取及洗涤移液不精确检查和校正移液器精密度低洗涤不充分按说明书要求充分洗涤和浸泡混匀不充分和吸取试剂不足充分混匀和吸取试剂重复利用吸头、容器和覆膜使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜加样不精确检查......

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