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敲除验证抗体

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为什么要对抗体进行敲除验证?

找零难?支付宝应运而生了!打车难?滴滴出行应运而生了!抗体特异性验证难?敲除验证应运而生了!

敲除是怎么做的?

具备CRISPR/Cas9技术平台和慢病毒/腺病毒转染平台。下图为慢病毒侵染系统和CRISPR/Cas9技术结合转染目的细胞。敲除是怎么做的

抗体是怎么进行敲除验证的?

以BECN1为例:(1)选择序列并化学合成20nt的guide序列及其互补序列,构建含有sgRNA序列信息的LentiCRISPRv2重组载体。抗体是怎么进行敲除验证的(2)重组载体和慢病毒包装质粒共同转染293T细胞,收集病毒颗粒直接侵染MCF-7细胞株,通过嘌呤霉素筛选,最终获取稳定转染的细胞株。(3)在细胞株内,Cas9和sgRNA结合成剪切复合体,被转运进入细胞核,以完成对sgRNA互补DNA片段的剪切。测序结果如下:抗体是怎么进行敲除验证的(4)抗体的敲除验证结果:
利用成功敲除BECN1的细胞株检测相应的抗体,结果显示敲除成功的细胞系中,抗体检测到的BECN1表达量低。证明这些抗体是特异识别目的蛋白的。检测结果如下:
抗体是怎么进行敲除验证的

Cloud-Clone部分抗体的敲除验证结果

Cloud-Clone经过敲除验证的部分抗体列表

货号指标敲除验证使用的细胞系
MAA788Hu22Programmed Cell Death Protein 1 Ligand 1 (PDCD1LG1)MB231
MAB062Hu22Heat Shock 70kDa Protein 1 Like Protein (HSPA1L)Raji, Hela, HepG2
MAC823Hu22Thymidine Kinase 1, Soluble (TK1)MCF7, 293T, Hela
MAE786Hu21Annexin A3 (ANXA3)HepG2
MAE787Hu22Annexin A1 (ANXA1)Hela, HepG2
PAA009Hu02Angiopoietin 2 (ANGPT2)K562
PAA150Hu01Carcinoembryonic Antigen (CEA)Hela
PAA153Hu01Alpha-Fetoprotein (aFP)HepG2
PAA492Hu01Keratin 1 (KRT1)A431, A375, H460, Hela
PAA537Hu02 Enolase, Neuron Specific (NSE)HepG2, 293T, A549, MCF7
PAA651Hu01Hyaluronan Binding Protein 1 (HABP1)Hela, A549
PAA751Hu01Programmed Cell Death Protein 1 (PDCD1)Jurkat
PAA778Hu01B-Cell Leukemia/Lymphoma 2 (Bcl2)Jurkat, U-937
PAA853Hu03Caspase 8 (CASP8)Hela, HepG2
PAB215Hu03Fibrinogen Beta (FGb)Hela
PAB231Hu01Keratin 18 (KRT18)Hela, MCF7
PAB233Hu01Cyclin Dependent Kinase 4 (CDK4)Hela, MCF7
PAB698Hu01Lactate Dehydrogenase B (LDHB)Jurkat, PC3, A431
PAB769Hu01S100 Calcium Binding Protein A6 (S100A6)Hela, A549, MCF7
PAB905Hu01Interleukin 7 Receptor (IL7R)K562, Jurkat
PAC598Hu03Vanin 1 (VNN1)BXPC-3, PC-3
PAE528Hu01Phosphoglycerate Mutase 1, Brain (PGAM1)A431
PAE748Hu01Karyopherin Alpha 2 (KPNa2)HepG2, 293T, Raji
PAF460Hu01Folate Receptor 1, Adult (FOLR1)Hela, MCF7
PAA399Mu01High Mobility Group Protein 1 (HMG1)HepG2
PAA700Mu01Membrane Protein, Palmitoylated 6 (MPP6)HepG2, 293T
PAK078Mu01Fas Associating Death Domain Containing Protein (FADD)RaW264.7
PAA849Ra01Glycogen Phosphorylase, Liver (PYGL)HepG2
PAB083Ra01Superoxide Dismutase 2, Mitochondrial (SOD2)Hela, MCF7
PAA929Bo01Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)HepG2

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