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血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 5 (ADAMTS5)

ADMP-2; Aggrecanase-2

  • 血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)产品包装(模拟)
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  • 血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)实验结果图
  • SEK205Mu.jpg标准曲线图
  • Certificate通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证

特异性

本试剂盒用于检测血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率。

样本回收率范围(%)平均回收率(%)
serum(n=5)78-9085
EDTA plasma(n=5)95-10299
heparin plasma(n=5)79-9186

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差： CV<10%
批间差： CV<12%

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)，并倍比稀释成1:2，1:4，1:8，1:16的待测样本，线性范围即为稀释后样本中血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)含量的测定值与理论值的比率。

样本1:21:41:81:16
serum(n=5)81-101%89-96%83-104%79-95%
EDTA plasma(n=5)80-97%92-105%78-99%95-105%
heparin plasma(n=5)85-93%86-99%88-105%83-96%

稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

实验流程

1. 实验前标准品、试剂及样本的准备；
2. 加样（标准品及样本）100µL，37°C孵育1小时；
3. 吸弃，加检测溶液A100µL，37°C孵育1小时；
4. 洗板3次；
5. 加检测溶液B100µL，37°C孵育30分钟；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分钟；
8. 加终止液50µL，立即450nm读数。

实验原理

将血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。

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参考文献

杂志参考文献
PLoS ONEA Combinatorial Relative Mass Value Evaluation of Endogenous Bioactive Proteins in Three-Dimensional Cultured Nucleus Pulposus Cells of Herniated Intervertebral Discs: Identification of Potential Target Proteins for Gene Therapeutic Approaches[Plosone: Source]
Osteoarthritis and CartilageLack of anti-inflammatory and anti-catabolic effects on basal inflamed osteoarthritic chondrocytes or synoviocytes by adipose stem cell-conditioned medium[PubMed: 26521751]
Journal of Cellular and Molecular MedicineVIP and CRF reduce ADAMTS expression and function in osteoarthritis synovial fibroblasts[Pubmed:26818776]
Int Wound J.From varices to venous ulceration: the story of chronic venous disease described by metalloproteinases.[Pubmed:26991748]
The American journal of pathologyHealthy and Osteoarthritic Synovial Fibroblasts Produce a Disintegrin and Metalloproteinase with Thrombospondin Motifs 4, 5, 7, and 12: Induction by IL-1β and Fibronectin and Contribution to Cartilage Damage.[pubmed:27449198]
PLoS One.Self-complementary adeno-associated virus serotype 6 mediated knockdown of ADAMTS4 induces long-term and effective enhancement of aggrecan in degenerative human nucleus pulposus cells: A new therapeutic approach for intervertebral disc disorders.[pubmed:28207788]
PLoS OneSelf-complementary adeno-associated virus serotype 6 mediated knockdown of ADAMTS4 induces long-term and effective enhancement of aggrecan in degenerative human nucleus pulposus cells: A new therapeutic approach for intervertebral disc disorders[10.1371:journal.pone.0172181]
International Wound JournalFrom varices to venous ulceration: the story of chronic venous disease described by metalloproteinases[pubmed:26991748]
BMC musculoskeletal disordersHemoglobin stimulates the expression of ADAMTS-5 and ADAMTS-9 by synovial cells: a possible cause of articular cartilage damage after intra-articular hemorrhage.[pubmed:29137610]
Journal of Clinical MedicineThe Effects of TNF-α Inhibition on the Metabolism of Cartilage: Relationship between KS, HA, HAPLN1 and ADAMTS4, ADAMTS5, TOS and TGF-β1 Plasma …[Pubmed:35407621]