食欲素A(OXA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
ELISA Kit for Orexin A (OXA)
Hypocretin-1
特异性
本试剂盒用于检测食欲素A(OXA)，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。
回收率
分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的食欲素A(OXA)（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率。
| 样本 | 回收率范围(%) | 平均回收率(%) |
| serum(n=5) | 87-101 | 92 |
| EDTA plasma(n=5) | 84-91 | 88 |
| heparin plasma(n=5) | 98-105 | 102 |
精密度
精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差： CV<10%
批间差： CV<12%
线性
在定值血清及血浆样本内加入适量的食欲素A(OXA)，并倍比稀释成1:2，1:4，1:8，1:16的待测样本，线性范围即为稀释后样本中食欲素A(OXA)含量的测定值与理论值的比率。
| 样本 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
| serum(n=5) | 89-101% | 88-101% | 94-103% | 82-103% |
| EDTA plasma(n=5) | 85-95% | 79-91% | 83-97% | 89-104% |
| heparin plasma(n=5) | 78-89% | 92-101% | 92-105% | 89-103% |
稳定性
经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
实验流程
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备；
2. 加样（标准品及样本）50µL，
加入50µL检测液A(临用前配制);
37°C温育1小时。
3. 洗板3次；
4. 加检测溶液B100µL，37°C孵育30分钟；
5. 洗板5次；
6. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分钟；
7. 加终止液50µL，立即450nm读数。
实验原理
本试剂盒应用竞争抑制酶联免疫分析法测定标本中待测物质水平。将食欲素A(OXA)单克隆抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中同时加入生物素标记的抗原和待测抗原(标准品或样本)，待测抗原与生物素标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。温育后经洗涤去掉未结合物，然后加入HRP标记的亲和素，经过温育和彻底洗涤后加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。
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参考文献
| 杂志 | 参考文献 |
| Frontiers in Neurology | Neuro-Glial and Systemic Mechanisms of Pathological Responses in Rat Models of Primary Blast Overpressure Compared to “Composite” Blast[PubMed: PMC3275793] |
| Neurological Sciences | Pentylenetetrazol-induced seizures are exacerbated by sleep deprivation through orexin receptor-mediated hippocampal cell proliferation[Pubmed: 23852314] |
| Peptides | Orexin-A-induced ERK1/2 activation reverses impaired spatial learning and memory in pentylenetetrazol-kindled rats via OX1R-mediated hippocampal neurogenesis.[Pubmed: 24321199] |
| Alcohol Alcohol | Orexin in Patients with Alcohol Dependence Treated for Relapse Prevention: A Pilot Study[PubMed: 26597795] |
| Indian Journal of Medical Research and Pharmaceutical Sciences | Evaluation of Antidiabetic And Insulintropic Potential of Nigella Sativa Seeds Water Extract and /or Alpha Lipoic Acid in Type 2 Diabetic Rats[Issues%20Pdf: Vol.2] |
| J Clin Res Pediatr Endocninol | Correlation of Brain Neuropeptide (Nesfatin-1 and Orexin-A) Concentrations with Anthropometric and Biochemical Parameters in Malnourished Children[PubMed: 26831553] |
| Neural Regen Res | Resuscitation therapy for traumatic brain injury-induced coma in rats: mechanisms of median nerve electrical stimulation[PubMed: 26170820] |
| Mol Med Rep | Wake-promoting actions of median nerve stimulation in TBI-induced coma: An investigation of orexin-A and orexin receptor 1 in the hypothalamic region[PubMed: 26059340] |
| Mol Neurobiol | Application of the Co-culture Membrane System Pointed to a Protective Role of Catestatin on Hippocampal Plus Hypothalamic Neurons Exposed to Oxygen and Glucose Deprivation[article:10.1007] |
| Neural Regeneration Research | Wake-promoting effects of vagus nerve stimulation after traumatic brain injury: upregulation of orexin-A and orexin receptor type 1 expression in the prefrontal …[Pubmed:29557373] |
| Journal of Translational Medicine | Recurrent circadian fasting (RCF) improves blood pressure, biomarkers of cardiometabolic risk and regulates inflammation in men[Pubmed: 31426866] |
| iraqi journal of science | Relationship Between Orexin-A and Insulin Resistance in Patients with Type 2 Diabetes Mellitus[] |
| Brain Sci | Changes in the Orexin System in Rats Exhibiting Learned Helplessness Behaviors[34942932] |
