免疫球蛋白G2β(IgG2b)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

ELISA Kit for Immunoglobulin G2b (IgG2b)

    特异性

    本试剂盒用于检测免疫球蛋白G2β(IgG2b),经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
    由于受到技术及样本来源的限制,不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测,因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

    回收率

    分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的免疫球蛋白G2β(IgG2b)(加标样品),重复测定并计算其均值,回收率为测定值与理论值的比率。

    样本回收率范围(%)平均回收率(%)
    serum(n=5)83-9591
    EDTA plasma(n=5)79-9588
    heparin plasma(n=5)95-104101

    精密度

    精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
    批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
    批间差:选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
    批内差: CV<10%
    批间差: CV<12%

    线性

    在定值血清及血浆样本内加入适量的免疫球蛋白G2β(IgG2b),并倍比稀释成1:2,1:4,1:8,1:16的待测样本,线性范围即为稀释后样本中免疫球蛋白G2β(IgG2b)含量的测定值与理论值的比率。

    样本1:21:41:81:16
    serum(n=5)82-93%97-105%97-105%91-99%
    EDTA plasma(n=5)79-101%92-105%87-96%94-101%
    heparin plasma(n=5)96-105%83-97%91-103%79-101%

    稳定性

    经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。
    为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

    实验流程

    1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
    2. 加样(标准品及样本)100µL,37°C孵育1小时;
    3. 吸弃,加检测溶液A100µL,37°C孵育1小时;
    4. 洗板3次;
    5. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
    6. 洗板5次;
    7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分钟;
    8. 加终止液50µL,立即450nm读数。

    实验原理

    将免疫球蛋白G2β(IgG2b)抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的免疫球蛋白G2β(IgG2b)与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的免疫球蛋白G2β(IgG2b)抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白G2β(IgG2b)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。

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    参考文献

    杂志参考文献
    Veterinary MicrobiologyOptimized GAPDH-truncated immunogen of Streptococcus equi elicits an enhanced immune response and provides effective protection in a mouse model[33647714]