武汉云克隆科技股份有限公司

近年来，全球肾病的发病率呈逐年上升的趋势。作为继肿瘤、心脏病之后的第 三大“杀手”，医务工作者在临床诊断中却很能难对早期肾病进行确诊。这主要是由 于患者在肾病早期症状不明显，很容易延误病情。另外，判断肾脏损伤采用化验尿 常规、渗透压、血肌酐、尿素氮、内生肌酐清除率等几项指标，但多数情况下当这 些指标增高时，很多肾脏损害已经非常严重或已产生了不可逆的损伤，因此，寻找 能早期发现肾脏疾病的指标已成为医学界的热点之一。 

目前，很多学者把尿 N-乙酰-β-D- 氨基葡萄糖苷酶（NAG 酶）活性作为 损伤的早期指标，而最新的前沿研究 证明，除 NAG 酶之外，肾损伤分子-1 （kidney injury molecule-1, Kim-1）亦 能非常迅速、灵敏、特异地反映各种 肾脏疾病的损伤及恢复过程，为早期 肾损伤提供了另一种重要的检测指 标，该检测指标联合 NAG 酶检测早 期或急性肾损伤，具有准确性高、特异性好、假阳性率低等优点，因此在临床上具 有广阔的应用前景。以下就肾损伤分子-1 的结构特点及相关检测产品进行具体介 绍。

肾损伤分子-1 是一种新型的 I 型跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白基因超家族。由 甲肝病毒受体-1（HAVcr-1）基因编码，其蛋白结构如图 1 所示，胞外片段由一个 粘液素功能区连接一个由六个半胱氨酸组成的球蛋白样功能区构成。正常情况下， 肾脏组织几乎不表达 Kim-1 蛋白，但是在肾脏损伤后数小时内 Kim-1 的表达水平 即显著升高。通过原位杂交和免疫组化分析发现 Kim-1 主要表达于损伤后再生的 去分化近端肾小管上皮细胞，尤其在近端小管 S3 段丰富的外髓质区域。 

为了使研究人员能更方便地研究 Kim-1 的功能并更准确迅速检测体内外 Kim-1 的 蛋 白 水 平 ， Cloud-Clone Corp. 成功构建了肾损伤分子 -1 胞 外 段 （Ser21~Ala240）的重组质粒，并成功表达了 Kim-1 重组蛋白（RPA785Hu01）（如 图 2 所示）。 

接着，优尔生公司利用该重组蛋白，通过免疫动物并采用亲和层析的方法获得 了高纯度的人肾损伤分子-1（Kim-1）多克隆抗体 （PAA785Hu01）并通过 Western Blot 等方法检测发现，该抗体可特异地结合 Kim-1 蛋白（如图 3 所示）。此外， Cloud-Clone Corp.还成功开发了针对人 Kim-1 的检测试剂盒 （SEA785Hu 和 SCA785Hu）。该试剂盒可定量检测各种人体样品，包括人组织匀浆、尿液、细胞 培养上清或其它相关生物液体中的 Kim1 含量。另外，优尔生公司还开发了针对人 NAG 酶的检测试剂盒（SED161Hu），方便实验人员同时检测临床样品中的 Kim-1 和 NAG 酶含量，从而对病人的病情进行更加准确地分析。

此外，Cloud-Clone Corp.还开发了人肾损伤分子-1（Kim-1）的单克隆抗体 （MAA785Hu22）并进行 IHC 检测，结果显示在肾炎患者的肾组织中可检测到 Kim-1 的高水平表达，并且信号强烈表达于肾小管上皮细胞膜上，如图 4 所示。接 着根据客户需求，本公司对该单克隆抗体分别进行了荧光素和生物素标记，得到抗 体：PAA785Hu81 和 PAA785Hu71，这样得到的单克隆抗体不仅能特异性识别 Kim-1，而且由于抗体带有荧光或生物素标记，可更方便直接对该蛋白进行体内外 检测。

除以上产品外，Cloud-Clone Corp.公司还成功开发了针对小鼠及大鼠的 Kim-1 的相关产品。其具体信息如表 1 所示，这些产品为实验人员研究 Kim-1 的功能提 供了非常完善的技术平台。

表 1. Kim-1 其它相关产品信息表