转化生长因子β-样本前处理方案
转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)属于一组新近发现的调 节细胞生长和分化的 TGF-β超家族，广泛存在于动物正常组织细胞核转化细胞 中，具有促进胚胎发育、调节免疫、生长抑制、创伤修复、促进血管生成和细 胞外基质沉淀等功能。由于这种细胞因子可促使正常的成纤维细胞的表型发生 转化，协同表皮生长因子，改变成纤维细胞贴壁生长特性，从贴壁依赖性生长 转变为贴壁非依赖性生长的一类物质，故得以命名。
哺乳动物中目前发现有 3 种 TGF-β，分别为 TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3。 它们分别位于不同的染色体上，其氨基酸序列之间有 70-80%的同源性。三种 TGF-β中，TGF-β1 在体细胞系中所占比例最高(>90% )，活性最强。TGF-β1 可 由巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞和软骨细胞产生，也可由白血病细胞产生， 主要分布于人血小板和哺乳动物骨中；TGF-β2 可由角化细胞、颗粒层细胞和神 经胶质细胞瘤细胞产生；TGF-β3 以间充质起源的细胞产生为主。
机体内细胞内产生的 TGF-β为非活性同型二聚体的前体分子。合成后， TGF-β同型二聚体与延迟相关肽（Latency Associated Peptide, LAP）（转化生长因 子β N 端皆具有一个长 20~30 个氨基酸序列）形成的复合称为小潜伏复合物 （Small Latent Complex, SLC）。在细胞内，SLC 与 TGF-β结合蛋白（Latent TGF-β-Binding Protein, LTBP）结合形成了复杂的大潜在复合物（Large Latent Complex, LLC）。TGF-β以 LLC 的形式由细胞分泌到细胞外基质（extracellular matrix, ECM）。也就是说在血清血浆等生物样本中，大多数 TGF-β是以 LLC 的 形式存在，由于本试剂盒中的抗体是特异性地识别游离的 TGF-β，要达到定量 检测生物样本中的 TGF-β的目的，需要将样本作前处理释放 TGF-β，即是 TGF-β 与结合蛋白解离成游离的 TGF-β蛋白。具体的操作方法如下：
[样本前处理步骤]
1、 血清/血浆
1） 取 50μL 样本，加入 10μL 1N HCl，混匀。
2） 室温静置 10min。
3） 加入 10μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES，混匀。
4） 加入 80μL 标准品稀释液，混匀后即可检测（2h 内检测）。
5） 计算结果时应乘以相应稀释倍数（3）。
2、 细胞培养上清
1） 取 100μL 细胞培养上清，加入 20μL 1N HCl，混匀。
2） 室温静置 10min。
3） 加入 20μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES，混匀后即可检测（2h 内检测）。
4） 计算结果时应乘以相应稀释倍数（1.4）。
以人 TGF-β1 定量检测试剂盒 SEA124Hu 为例, 我们对比血清样本处理前和 处理后的测值。发现前处理后，LLC(TGF-β1 与 LAP 及 LTBP 的结合蛋白)解离 成游离的 TGF-β1 蛋白，样本测值有明显地升高。结果如图 1。直接检测未经处 理的样本，则无法准确显示血清血浆样本中 TGF-β1 的含量。也就是说，为准确 检测生物样本中的 TGF-β1，建议先将样本作前处理。
转化生长因子-β系列产品及发表文献信息如下，敬请关注。