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蛋白质印迹（Western Blot）是根据抗原抗体特异性结合的原理检测复杂样本 中的某种蛋白的方法。将混合抗原样本在凝胶板上进行单向或双向电泳，经过 PAGE 分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白 质，且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽 作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与或标记的第二抗体起反应，经过底物显 色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应 用于鉴定蛋白以及对蛋白进行定性和半定量分析。

蛋白质印迹分为蛋白质分离、蛋白质印迹和蛋白质鉴定三个步骤。每个步骤和 环节都可能影响到最终结果, 要想获得理想的实验结果，每个步骤都不能马虎。现 就实验中遇到的常见问题进行分析总结，给出解决方案，以提高蛋白质印迹实验的 成功率。

1.蛋白质分离-电泳中的问题

蛋白质印迹实验是建立在聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-PAGE 基础上的，所以蛋 白质印迹有些问题是由前期电泳引起的。因此，在此简单介绍电泳中出现的问题。

出现的问题	可能的原液	处理方法	图例
A. “ 微笑”（） 形带	凝胶浓度过高； 凝胶中部凝固不均匀，多 出现于较厚的凝胶中； 电泳系统温度偏高	选择合适浓度的凝胶； 待凝胶充分凝固后再做实 验； 水浴降温电泳。
B.“皱眉”（）形 带	装置不合适，特别可能是 凝胶和玻璃挡板底部有 气泡。	可在两板间加入适量缓冲 液，以排除气泡
C 拖尾	样品融解效果不佳 分离胶浓度过大引起的	加样前离心； 选择适当的样品缓冲液， 加适量样品促溶剂； 重新配制电泳缓冲液； 降低凝胶浓度；
D 纹理	样品不溶性颗粒引起的	加样前离心； 加适量样品促溶剂；
E 条带偏斜	电极不平衡或者加样位 置偏斜	检查电极是否接触良好； 拔梳子的时候动作轻柔， 保证加样孔的平坦；
F 条带向两边扩 散	加样量过多	样本在上样前先进行蛋白 定量，根据具体浓度选择 合适的上样量；

2.蛋白质转印-转膜中的问题

转膜是蛋白质印迹实验中关键的一步。转膜不完全和转膜过度都会导致转膜效 率低，而导致在检测鉴定是出现信号弱或无信号的情况出现。优化转膜条件可有效 提高转膜效率。

表2. 转膜中的问题及解决方法