云克隆的改良式酵母表达系统
众所周知，在基因工程领域，常用的表达系统共有三种，包括：原核表达系统 (大肠杆菌 E. coli 表达系统)、酵母表达系统(P. Pichia 表达系统)和哺乳动物细胞表 达系统。原核表达系统由于操作简单、成本低廉、表达效率高等优点，被广泛应用 于外源基因的蛋白表达。但同时，原核表达体系也有一些自身的缺点，比如容易形 成包涵体，不能进行翻译后加工等等。
为了尽量避免原核表达系统自身的不足，Cloud-Clone Corp.又另外开发建立了 酵母表达平台。酵母表达外源基因具有一定的翻译后加工能力，收获的外源蛋白质 具有一定程度上的折叠加工和糖基化修饰，性质较原核表达的蛋白质更加稳定，特 别适合于表达真核生物基因和制备有功能的表达蛋白质。某些酵母表达系统具有外 分泌信号序列，能够将所表达的外源蛋白质分泌到细胞外，因此很容易纯化。
酵母表达外源基因的一般步骤如图 1 所示，但是 Cloud-Clone Corp.在开发过程 中发现，原有的酵母表达系统也存在一定不足，比如诱导物甲醇易在培养过程中挥 发，浓度会降低，从而影响最终蛋白的产量等。针对这些不足，Cloud-Clone Corp. 又将以上系统进行了以下改进：
1. 在加入甲醇诱导目标蛋白表达过程中，通过不断调整甲醇浓度，保持表达 体系稳定性，以达到菌株的最佳扩增条件，保证目标蛋白产量的最大化；
2. 在培养含阳性克隆的酵母扩增期间，通过改良培养瓶的封口装置，以提高 酵母扩增效率；
3. 在通过 SDS-PAGE 电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况后，根据不同 蛋白的特性，对表达条件及纯化方式进行再次优化。
通过 Cloud-Clone Corp.的表达平台优化，目标蛋白的表达效率及纯度都有了更 一步地提升，如图 2 所示，在经过改良扩增及纯化方案之后，酵母表达的人 CCL18 蛋白在纯化后（Lane 2），相对于纯化前（Lane 1），在产量和纯度方面都有了很 大提高，更能满足科研人员的需要。
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