ELISA法检测细胞凋亡的优势
细胞凋亡,亦称细胞程序性死亡,是细胞在一系列内源性基因的调控下发 生的自然或生理性死亡的过程。细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞死亡形 式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区 别开来。
传统的检测细胞凋亡的方法有很多种,主要包括:
1. 细胞凋亡的形态学检测,包括直接用光学显微镜、倒置显微镜、荧光显 微镜、共聚焦激光扫描显微镜或透射电子显微镜等观察是否有凋亡小体;
2. 磷脂酰丝氨酸外翻分析(AnnexinV 法),包括用标记了的 Annexin-V 作 为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜来检测细胞凋亡是否发生;
3. DNA ladder 检 测 , 又 被 称 作 TUNEL 法 ( terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling)(末端脱氧核苷酸转移酶介导 的 dUTP 缺口末端标记测定法)也称 DNA 断裂的原位末端标记法,这一方法 能对,DNA 分子断裂缺口中的 3’-OH 进行原位标记,借助一种可观测的标记物, 如荧光素,能对凋亡细胞的核 DNA 中产生的 3’-OH 末端进行原位标记,用荧 光显微镜即可进行观察。
但是,以上的细胞凋亡检测方法大部分都是定性而非定量检测,很难通过 数据反映不同细胞的细胞凋亡程度的高低,其中虽然流式细胞术可定量检测细 胞凋亡,但由于成本较高且需要流式细胞仪,同时对实验人员的实验技术要求 较高,因此对于初学者而言,往往需要大量的实验经验积累才能得到较稳定的 结果。而随着基因工程技术的不断发展,ELISA 在细胞凋亡检测中的作用得到 了越来越多研究者的关注。
Caspase 家族在介导细胞凋亡过程中的作用逐渐引起了研究人员的注意, caspase-3 作为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥着重要功 能。Caspase-3 正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段, 其被激活,活化的 Caspase-3 由两个大亚基(17KD)和两个小亚基(12KD)组 成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死 亡细胞,caspase-3 的活性明显下降。根据这些特点,Cloud-Clone Corp. 开发了 胱天蛋白酶 3(CASP3,caspase-3)检测试剂盒(SEA626Hu),其可定量测定 人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液或其它相关生物液体中 CASP3 含量。
除此之外,Cloud-Clone Corp. 还开发了一些细胞凋亡调节蛋白的检测试剂 盒,包括但不限于:凋亡相关因子(FAS)检测试剂盒(SEA030Hu)、凋亡相 关因子配体(FASL)检测试剂盒(SEA031Hu)、B-细胞淋巴瘤因子 2(Bcl2) 检测试剂盒(SEA778Hu)、Bcl2 关联 X 蛋白(Bax)检测试剂盒(SEB343Hu)、 肿瘤蛋白 p53(TP53)检测试剂盒(SEA928Hu)。另一方面,Cloud-Clone Corp. 为了满足不同实验者的需要,还开发了除人物种之外的包括大鼠、小鼠、牛等 在内其它物种的细胞凋亡相关蛋白检测试剂盒,这些检测盒都为细胞凋亡的检 测提供了非常好的工具 (关于细胞凋亡检测试剂盒的详细介绍,还可参见:细 胞凋亡相关蛋白的系列检测产品)。
与其它传统检测细胞凋亡的方法相比,ELISA 法检测细胞凋亡具有操作简 便、省时、灵敏度高、可同时检测大量样品等优点,其与其它传统检测细胞凋 亡的方法比较总结如下图:
名称 | 定性/ 定量 | 操作技能 | 早期/晚 期 | 灵敏度 | 精确度 | 对实验仪器要求 | 实验成本 |
镜检法 | 定性 | 高 | 早期 | 低 | 低 | 需显微镜 | 低 |
TUNEL法 | 定性 | 高 | 早期 | 低 | 低 | 需显微镜和石蜡切片机 | 高 |
流式细胞术 | 定量 | 高 | 早晚期均可 | 高 | 高 | 需流式细胞仪 | 高 |
ELISA法 | 定量 | 适中 | 早晚期均可 | 高 | 高 | 仅需酶标仪 | 适中 |
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