免疫沉淀（Immunoprecipitation）实验操作流程
样本裂解液的制备
1. 细胞裂解液的制备
1）收集细胞：将细胞悬液（悬浮细胞直接收集，贴壁细胞可以用细胞刮或者胰酶消化后收集）收集于离心管中，4℃ 1500rpm离心5min后收集细胞沉淀；用预冷的1×PBS洗涤细胞2次，收集细胞沉淀。
2）裂解细胞：向细胞沉淀中加入提前预冷的裂解液（裂解液在临用前加入蛋白酶抑制剂），用枪头将细胞团块吹散，放要床上冰上裂解30min（如果细胞溶解不完全，冰上短时超声裂解1-2min）。
3）4℃ 10000rpm离心10min，取适量上清测蛋白浓度，剩余上清根据需求分装与1.5ml EP管中，置于-80℃冰箱保存。
2. 组织样本裂解液的制备
1）解剖实验动物，取组织；在冰盒上用剪刀将组织剪碎，每20~50mg对应加入1mL新鲜配置的预冷裂解液。冰浴条件下玻璃匀浆器研磨样品或者液氮研磨法（如果未完全溶解，可以短时超声裂解1-2min）。
2）4℃ 10000rpm离心10min，取适量上清测蛋白浓度，剩余上清根据需求分装与1.5ml EP管中，置于-80℃冰箱保存。
抗原抗体免疫沉淀步骤
1. 根据需求取适量的已准备好的样本裂解液300-400ul到1.5mL EP管中，加入约等体积的含蛋白酶抑制剂的1×PBS，混匀，冰上操作。
2. 加入1-5ug抗体到样本裂解液中（阴性对照用和一抗同种属来源的IgG），4℃旋转过夜。
3. 取一定量的洗涤好的protein A/G-beads（根据抗体的亚型选择Protein A或G，一般50ul左右），分别加入到不同的抗原-抗体混合物的EP管中，4℃旋转4h。
4. 免疫沉淀反应后，4℃ 以1000rpm速度离心3 min，弃去上清；然后用洗液洗涤沉淀3次，每次5min；最后一次洗涤留30μl洗液。
5. 向每个EP管中加入30μl的2×加样缓冲液，沸水煮5min。
6. 4℃ 10000rpm离心5min，将离心后的上清转移到新的EP管中并做好编号，直接上样进行SDS-PAGE和Western Blot检测。
SDS-PAGE电泳和Western Blot检测分析
SDS-PAGE电泳和WB检测步骤，请参考：http://www.cloud-clone.cn/topic/201804280916369609.html。