NGF活性蛋白诱导PC12细胞分化及其结合活性的验证
NGF活性蛋白诱导PC12细胞分化实验
实验原理：
神经生产因子（Nerve growth factor, NGF）是一种神经营养因子和神经肽，主要参与某些神经元的生长发育、维持、再生长和分化作用。PC12细胞株来源于一种可移植的鼠嗜铬细胞瘤，该细胞对NGF有可逆的神经元显形反应，当PC12细胞暴露在NGF，细胞会在一周之内作出反应，主要是停止细胞分裂并延伸神经突。
实验方案：
PC12细胞培养在含5%胎牛血清和10%马血清的Ham's F12K培养基中，当细胞到达对数生长期时，换用含有10ng/ml NGF重组蛋白的新鲜培养基，在倒置显微镜下每天观察细胞的形态。
实验结果：
A. PC12细胞培养在含5%胎牛血清和10%马血清的Ham's F12K培养基中，10ng/ml NGF重组蛋白刺激6天后的细胞形态；
B. PC12细胞培养在含5%胎牛血清和10%马血清的Ham's F12K培养基中培养6天后的细胞形态。
结果分析：
云克隆重组NGF活性蛋白与PC12细胞共培养，可诱导其转变为类似于交感神经元的形态，突起逐渐增多并延长。
NGF活性蛋白与a2M的结合活性实验
实验方案：
α2-巨球蛋白（Alpha-2-Macroglobulin, a2M）是NGF的一个作用因子，本实验通过酶联免疫吸附试验来检测a2M与NGF的相互作用。
1. 重组NGF蛋白用PBS，含 0.01% BSA（pH 7.4）稀释成不同的浓度；
2. 取100μL加入到包被有人重组a2M的微孔板中，37℃条件下孵育2h；
3. 用PBST洗板，以anti-NGF多克隆抗体孵育1h，洗板3次；
4. 以HRP标记的二抗孵育，洗板3次；
5. 加入底物溶液，37℃孵育15-25min；
6. 加入终止液并在450nm波长下读数。
实验结果：
结果分析：
云克隆重组NGF活性蛋白与a2M有结合活性，结果显示呈现剂量反应关系。
参考信息：
云克隆NGF活性蛋白货号：APA105Hu01