活性蛋白—粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)活性蛋白
GM-CSF是一种单体糖蛋白,作为一种细胞因子,可刺激干细胞产生粒细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)和单核细胞。众所周知,人红系白血病细胞TF-1,白细胞介素3(IL-3)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)可促进TF-1细胞增殖。因此,GM-CSF的活性可通过TF-1细胞增殖实验来测定的。据报道,GM-CSF也能诱导人单核细胞白血病细胞株U937分化。
实验方案-1
TF-1细胞作为待刺激细胞,用不同浓度rhGM-CSF与TF-1细胞在96孔微孔板中培养,每天用倒置显微镜观察细胞,用CCK-8细胞计数试剂盒(cell Counting Kit-8)检测细胞增殖情况。
实验结果-1:
I 用GM-CSF(10ng/mL)孵育3d后,TF-1细胞较对照组明显增殖(Figure 1)。
II 用GM-CSF(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)孵育3d后,用CCK-8法检测TF-1细胞增殖情况,与对照组比较有显著性差异(Table 1)。
实验方案-2
U937细胞作为待刺激细胞,用不同浓度的rhGM-CSF(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)与U937细胞共培养,每天用倒置显微镜观察细胞形态变化。
实验结果-2 U937细胞与GM-CSF(10ng/mL)共培养5天后,可观察到细胞形态变化,用GM-CSF(10ng/mL)刺激5天后,U937细胞形态发生改变,具有树突状细胞的形态特征(Figure 2)。