过敏毒素C5a活性蛋白
过敏毒素C5a是补体系统的组成部分，能够促进中性粒细胞和单核细胞向血管壁的迁移及粘附。C5a可诱导THP-1细胞趋化迁移。因此，采用24孔细胞迁移/趋化分析系统，检测C5a对人单核细胞株THP-1的趋化作用。
实验步骤：
将THP-1细胞接种到趋化小室的上室（100µL细胞悬浮液，10^6个细胞/mL重置于含有0.5%FBS的RPMI 1640中），将重组过敏毒素C5a（用无血清RPMI 1640分别稀释至50ng/mL和100ng/mL）加入趋化小室的下室。上室和下室使用聚碳酸酯过滤器（8µm孔径）分隔。由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而研究C5a对THP-1的趋化作用。在37℃，5%CO2孵育2小时后，除去过滤器，倒置显微镜低倍镜（×100）观察低室细胞，用高倍镜（×400）随机计数迁移细胞数（每个滤器5个视野）。
实验结果：
C5a能诱导THP-1细胞迁移。低倍镜下（×100）迁移的THP-1细胞如图1所示。
图1. C5a对THP-1细胞的趋化作用
（A）将THP-1细胞接种于趋化小室的上室，在下室加入50ng/mL的C5a，孵育3h后在低倍镜下（×100）观察细胞；
（B）将THP-1细胞接种于趋化小室的上室，下室加入100ng/ml的C5a，孵育3h后低倍镜（×100）观察细胞；
（C）将THP-1细胞接种于趋化小室的上室，在下室加入无C5a的无血清RPMI 1640，孵育3h后低倍镜（×100）观察细胞。
在高倍镜下（×400）随机选择5个视野对迁移细胞进行计数，统计数据如图2所示
图2. C5a对THP-1细胞的趋化作用。
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APA388Hu61 Active Complement Component 5a (C5a)