神经氨酸酶(NEU)活性蛋白
神经氨酸酶（Neuraminidase，NEU）是一种能分解（切断）神经氨酸糖苷键的糖苷水解酶。人类基因组中发现至少4种哺乳动物唾液酸酯酶同源物（见NEU1、NEU2、NEU3、NEU4）。体内缺乏神经氨酸酶，导致低聚糖在体内细胞中贮积，会引发唾液酸贮积症。在细胞内，组织蛋白酶A（Cathepsin A，CTSA）残基在溶酶体内与β-半乳糖苷酶（Galactosidase Beta，GLb）和神经氨酸酶NEU组成高分子量复合物。CTSA与这些糖苷酶的相互作用对它们进入溶酶体的正确途径是必须的，并防止它们发生溶酶体内水解。
实验原理：神经氨酸酶NEU可与CTSA结合。本实验通过结合ELISA检测重组人NEU和重组CTSA蛋白的相互作用。
实验方法：用含有0.01% BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀释NEU。将100μL样品移入CTSA蛋白预包被酶标板中，37℃孵育2小时。弃去孔内液体，用PBST洗涤。除去洗液，加入抗NEU-pAb孵育1小时，弃去孔内液体，用PBST洗板3次。用辣根过氧化物酶标记的二抗孵育后，弃去孔内液体，用PBST洗板3次。加入底物溶液后，在37℃下孵育15-25分钟。最后，向孔中加入50μL终止液，立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度。
实验结果：NEU和CTSA的结合活性如Figure 1所示，结合活性呈剂量依赖性。
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APB611Hu02 Active Neuraminidase (NEU)