蛋白产品选购使用有疑问?常见问题一次讲清
Q1 蛋白如何保存和重悬?
A1 蛋白的保存方法:如下图,参见说明书[STORAGE AND STABILITY],在推荐的条件下冷冻储存,蛋白自收到之日起至少12个月内保持稳定。重悬后,如需长期保存,建议分装后,-80℃冷冻保存,避免反复冻融。
蛋白的重悬:如下图,参见说明书[USAGE]。应选用推荐的buffer,并按产品说明书推荐的重悬浓度重悬蛋白。确定蛋白质量后,通过将质量除以浓度来计算体积(浓度=质量/体积)。例如,一瓶100μg的蛋白需要重悬至蛋白浓度500μg/mL。通过计算:100μg/500μg/mL=0.2mL,因此要获得该浓度的蛋白需向瓶中加入0.2mL(200μL)的蛋白buffer。
Q2 重组蛋白冻干前的buffer和浓度?
A2 蛋白冻干前的buffer和浓度:参见说明书[PROPERTIES]中的“Buffer formulation”和“Original Concentration”。见下图,蛋白冻干前的浓度为450μg/mL,蛋白冻干前的buffer是“PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose”。
Q3 重组蛋白分子量大小和全长不同的原因?
A3 ① 重组蛋白可能仅包含了蛋白的片段,而非全长。请查看说明书[PROPERTIES]中的“Residues”,这部分展示了重组蛋白的序列信息。如下图,蛋白序列为Val25~Glu352。
② 重组蛋白包含蛋白标签,重组蛋白的分子量是靶标蛋白和蛋白标签分子量的和。不同的蛋白标签分子量大小不同。说明书[PROPERTIES]中的“Tags”部分展示了重组蛋白的标签信息。如下图,重组蛋白带有N端His Tag。
Q4 重组蛋白可以用于活性实验吗?
A4 对于重组蛋白,我们暂未检测其活性,不确定蛋白是否具备活性。如果客户想要用于活性实验,可以先做预实验。以RPA124Mu01为例。
产品链接:
对于活性蛋白,可以参考说明书[ACTIVITY],给出了活性验证方案和结果。以APA899Hu61为例。
产品链接:
https://www.cloud-clone.com/manual/Active-Osteopontin-(OPN)-APA899Hu61.pdf
如果客户是用于其他的活性实验,与我们验证的方案不同,请先进行预实验。
Q5 重组蛋白的buffer可以更换吗?
A5 如果客户对于蛋白buffer有特殊要求,除了产品页面上显示的buffer,云克隆还接受定制配方(不含tris、不含skl等)。请联系云克隆销售团队/当地的分销商,分享您的请求就能获取解决方案。
Q6 重组蛋白是carrier free还是animal free?
A6 重组蛋白产品是“carrier free” & “animal free”。
Q7 我收到蛋白产品时温度已接近室温,但产品标签和数据显示它将在-80ºC下储存。这是一个错误吗?产品活性是否会受到影响?
A7 蛋白产品可在室温下运输,不会受到影响。冻干提高了产品的稳定性,同时减少了包装材料和运输费用。我们对冻干产品进行了“加速稳定性测试”,数据表明,7天内室温运输的冻干产品可保持完全活性。我们将保证并支持在该时间段内交付并妥善储存的产品性能。如果产品未在7天内送达,或在收到后未正确储存,请联系技术人员获取解决方案。
Q8 订购了50μg蛋白,但是收到的蛋白量明显高于50μg。这是一个错误吗?
A8 瓶中的粉末是靶标蛋白以及蛋白缓冲液盐离子。冻干前蛋白溶解在蛋白缓冲液中,冻干仅去除了水分,缓冲液中的盐离子和靶标蛋白形成了粉末。所以瓶中的物质质量比订购的蛋白量(50μg)多。
Q9 蛋白稀释液能订购吗?
A9 可以订购蛋白稀释液。
产品链接:https://www.cloud-clone.com/incrementServices/IS119.html
Q10 除了产品说明书上列出的应用,蛋白还能用于其他应用吗?
A10 对于未列出的应用,并不代表该应用不适用,只是暂时未验证。请广大客户自行验证,对蛋白应用进行扩展。完成实验分享数据,我们可以提供奖励。
Q11 云克隆可以提供蛋白产品定制服务吗?
A11 武汉云克隆为客户提供从基因到蛋白的一站式服务,客户也可以根据自身的需求灵活的选择服务项目或个性化的定制服务。目前云克隆建有原核(E.coli)表达系统与真核(酵母、杆状病毒一昆虫细胞、哺乳动物细胞)表达系统的重组蛋白表达平台。我们将在不断创新和改进的基础上,始终致力于为每一位客户提供最全面、最优质的服务。
蛋白定制流程:
基因克隆或者基因合成 →亚克隆质粒构建 →表达质粒构建 →表达条件优化 →蛋白表达 →蛋白纯化 →后期处理:去除内毒素、融合标签切除、活性测定等。
Q12 如何从蛋白产品说明书中获取有效信息?
A12 客户咨询的很多问题都能在产品说明书中找到。如蛋白来源,表达宿主,蛋白片段,蛋白标签,蛋白纯度,冻干前buffer,冻干前浓度,蛋白应用,等电点,蛋白分子量,蛋白用法(重悬方法),保存方法,以及验证结果图。
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