云克隆产品常见问题——抗体篇
Q1. 抗体如何保存？
A1. 参见说明书[ STORAGE AND STABILITY ]，不同的抗体产品保存方式也会存在差别。
1）大多数抗体产品保存方法如下图，分装，-20°C冻存，有效期为24个月。
2）荧光素标记抗体保存方法以LAC101Hu41（PE-Linked Polyclonal Antibody to Integrin Beta 8 (ITGb8)）为例，需4°C避光保存，有效期为12个月。
Q2. 抗体的浓度是多少？
A2. 参见说明书[ PROPERTIES ]中的“Concentration”。
Q3. 多克隆抗体所识别的抗原表位是哪一段序列？
A3. 多克隆抗体是由多个B细胞克隆产生的抗体混合物，能够识别同一抗原（免疫原）的多个不同表位（即抗原决定簇）。以PAB094Mu01（Polyclonal Antibody to Coagulation Factor XIII A1 Polypeptide (F13A1)）为例，其免疫原见下图。
Q4. 单克隆抗体抗原表位是哪一段序列？
A4. 对于单克隆抗体，目前没有检测过抗原表位。表位是一个仅包含约8至10个氨基酸的小片段，通常抗原（免疫原）有多个表位。只有当免疫原是肽时，表位才会很容易确定。然而，云克隆使用重组蛋白作为免疫原来制备抗体，当免疫原是一种含有多个表位的蛋白时，抗体识别表位的鉴定对大多数生物公司来说是一项艰巨的任务。所以针对单克隆抗体，我们能确定的是免疫原序列（见说明书），但不能确定所识别的单一表位。
Q5. 云克隆可以提供标记抗体吗？
A5. 云克隆研发的所有抗体产品，都可以通过偶联生产各种标记抗体，包括：Biotin、HRP以及约20种荧光素，如FITC、APC、PE、PerCP、Cy系列以及AF系列等。
Q6. 抗体产品是否适用于说明书中未列出的应用？
A6. 对于未列出的应用，目前暂时未验证。客户可对应用进行扩展，并分享给我们数据，我们可以提供奖励。
Q7. 抗体的缓冲液可以更换吗？
A7. 抗体的缓冲液是经过验证后优选的缓冲体系。如果客户的实验对于缓冲液有特别要求，抗体的缓冲液可以更换。除了产品页面上显示的原始缓冲液外，云克隆还接受定制配方（不含甘油、不含防腐剂等）。请联系云克隆销售团队/您当地的经销商，告知您的需求即可获取解决方案。
Q8. 当同一靶标物有多种抗体选择时，哪一种最适合我的应用？
A8. 通常，针对一种靶标物，云克隆可提供不止一种抗体产品。建议选用您所需的应用中表现最佳的抗体，可以参考产品说明书中验证过的实验结果图。如仍需帮助，请联系云克隆技术支持，以助您选择适合实验应用的最佳抗体。
Q9. WB实验条带为什么与文献/蛋白分子量不一致？
A9. WB实验验证的样本包括重组蛋白和天然样本。当样本是重组蛋白片段时，分子量与天然蛋白会存在差异，因而条带大小不同。但是这不影响抗体识别天然样本，当使用天然样本进行WB实验时，将会获得与天然蛋白分子量一致的条带。
以MAA909Hu22（Monoclonal Antibody to Ceruloplasmin (CP)）为例。下图A检测样本为重组人Ceruloplasmin蛋白片段 (Asp789~Gly1065 with N-terminal His Tag)，其分子量为33KDa，所以WB条带在33KDa。下图B检测样本为天然样本（人血清），人Ceruloplasmin蛋白由1065个氨基酸组成，预测分子量为122KDa，且天然蛋白可能经历表达后修饰（如糖基化、磷酸化、泛素化等），所以WB条带出现在140KDa。
Q10. 如何选择第二抗体？
A10. 选择第二抗体（二抗）是免疫实验（如Western Blot、ELISA、IF等）中的关键步骤，正确选择二抗能显著提高实验的特异性和信号强度。
选择二抗主要考虑以下因素：
1）一抗的种属来源和类型
如果一抗是来源于兔，则选用抗兔IgG，例如羊抗兔，豚鼠抗兔IgG等。
如果一抗是来源于小鼠，则选用抗小鼠IgG，例如羊抗小鼠，兔抗小鼠IgG等。
2）根据实验选择二抗标记物
二抗的标记物包括酶、生物素和荧光素等。标记物的选择取决于实验的类型。WB 和 IHC，通常选用酶标二抗，而IF检测中常使用荧光素标记二抗。
Q11. 云克隆可以提供抗体产品定制服务吗？
A11. 云克隆可以为客户提供抗体产品定制服务，客户也可以根据自身的需求灵活地选择服务项目或个性化的定制服务。基于公司自建的完善的技术平台，可提供多克隆抗体制备和单克隆抗体制备定制服务。
1)多克隆抗体的定制流程：
抗原→免疫动物→抗血清获取→抗体纯化
2)单克隆抗体的定制流程：
抗原→免疫动物→细胞融合和筛选 →腹水制备/细胞培养表达抗体→抗体纯化
3)定制服务特色
① 拥有专业从事动物饲养和动物实验的动物公司，动物死亡率<1%。
② 拥有多种实验动物可供选择。
③ 自主研发有高分子完全佐剂和不完全佐剂，其免疫效果是弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂的2-3倍。
④ 纳米乳化技术。
⑤ Easy-Fusion技术快速高效制备杂交瘤细胞。
⑥ 提供Protein A，Protein G，抗原亲和纯化等多种纯化方式。
⑦ 提供抗体标记服务，包括HRP、Biotin以及多种荧光素等。
⑧ 提供Western-blot、ICC/IHC、IP、FACS等多种检测方式。
Q12. 如何从抗体产品说明书中获取有效信息？
A12. 客户咨询的很多问题都能在产品说明书中找到，如抗体的来源、宿主、纯化方法、浓度、规格、物种交叉、免疫原、适用的实验以及推荐的抗体工作浓度、抗体buffer、抗体保存方法以及抗体验证结果图。
如果已有产品不能满足客户需求，请联系云克隆技术支持，以确认是否可以按客户需求制备产品。
