云克隆产品常见问题——ELISA试剂盒篇
Q1. 试剂盒产品的规格有哪些？
A1. 在售试剂盒产品规格分为96T和48T。96T试剂盒含有12条板条，每条板条有8孔；而48T试剂盒含有6条板条，每个板条有8孔。
试剂组分如下：
Q2. 试剂盒收到后如何保存？
A2. 参见说明书[ 试剂盒的储存及有效期 ]。
Q3. 样本如何制备及保存？
A3. 参见说明书[ 标本的采集与保存 ]
Q4. 标准曲线的拟合方法有哪些？
A4. 对于标曲拟合推荐选用二项式、四参数方程、半对数和双对数等拟合方法，可提供模板文件供老师们参考。
双抗夹心试剂盒（二项式拟合）
https://www.cloud-clone.cn/topic/201504010418350045.html
竞争抑制试剂盒（半对数拟合）
https://www.cloud-clone.cn/topic/201805311354357651.html
Q5. 检测溶液A、检测溶液B、标准品可不可以反复冻融或重复使用？
A5. 检测溶液A和检测溶液B以储液的形式保存以保证其稳定性，一次实验用多少则稀释多少。例如：一次实验用16孔，则可制备1.7mL的检测液A工作液（多制备100μL）。保存剩余未稀释的检测溶液A和检测溶液B供下次使用。
标准品中一旦加入标准品稀释液则不能保存供下次使用，因为低浓度的标准品在保存过程中很容易降解。我们的试剂盒提供了两瓶标准品，客户可以做预实验时使用一瓶，剩下未加入标准品稀释液的一瓶保存供下次使用。为了得到精准的结果，重悬过的标准品只能使用一次。
Q6. 试剂盒组分是否包含样本稀释液？如果没有，选用哪种稀释液稀释样本？
A6. 试剂盒组分不包含样本稀释液，推荐选用0.01M PBS稀释样本。云克隆提供商品化的PBS，货号是IS045。
如果老师想要自行配置，推荐 0.01M PBS的配方如下：
NaCl | 8g |
KCl | 0.2g |
Na2HPO4•12H2O | 3.63g |
KH2PO4 | 0.24g |
用双蒸水定容至1L，混匀，调节pH至7.0-7.2。 | |
Q7. 预实验是否必须要做？
A7. 预实验用于预测样本中靶标物的含量，以确定样本最适稀释比例。
对于血清血浆样本，可以参考说明书中推荐的稀释比例，直接检测。而其它类型的样本可能存在诸多影响靶标物含量的干扰因素，如：组织样本的干扰因素包括：组织类型、提取方式、刺激处理方式等；细胞样本的干扰因素包括：细胞状态、细胞数量、采样时间、刺激处理方式等；尿液&唾液&乳汁样本的干扰因素包括：饮水量、采样时间、采样方式等。这些干扰因素均会直接影响样本中靶标物的浓度，建议实验前先通过预试验，预测样本中靶标物的含量，确定样本最适稀释比例，再进行正式实验。还有一些特殊样本，如：阴道灌洗液、精液、龈沟液，试剂盒生产厂家不易获取，也不会用于试剂盒的验证，且相关的研究报道不多，这类样本也有必要先做预试验，摸索合适的样本稀释比例，再开展正式实验。
Q8. 如何设计ELISA预实验？
A8. 预实验推荐方案：
1）选定实验样本：预实验一般通过测定少数有代表性的样本来确定正式实验方案。通常，不同组别的样本由于处理或刺激，靶标物的表达量会产生变化，建议从各组样本中随机选择1-2例样本。如果预实验的试剂量有限，那么至少选两例样品，1例为理论上靶标物含量最低组的样品，另1例为理论上靶标物含量最高组的样品。
2）确定最适稀释比例：可根据样本中靶标物的浓度，选择5倍或10倍梯度稀释，同时测定标准品。可选做完整的标曲或部分浓度点（如空白孔、最低浓度孔、中间浓度孔及最高浓度孔）。将不同稀释比例的样本的O.D.值对比标准品O.D.值，各样本在某一稀释比例的O.D.值分布在标曲中值附近，则此为最适稀释比例。需要注意的是在做预实验时，一定要设置标曲，不设置标曲，就如同在丈量时没有尺一样，无法通过比较确定最适稀释比例。
Q9. ELISA试剂盒适用于测定哪些样本
A9. 产品说明书第一页[ INTENDED USE ]会给出适用的样本类型。对于没有提及的样本类型，建议自行做预实验确定是否适用。一般来说，只要目的物含量在试剂盒检测范围内的生物样本就可以用于检测。
Q10. ELISA试剂盒样本如何处理？
A10. 对于ELISA试剂盒样本处理方法，请参考以下链接：
酶联免疫吸附测定实验（ELISA）常见样本处理方法
常见样本：血液样本（血清、血浆）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞上清、粪便、尿液以及脑脊液。
https://www.cloud-clone.cn/topic/201804271043087152.html
酶联免疫吸附测定实验（ELISA）-特殊样本处理方法
特殊样本：痰液、肺泡灌洗液、唾液、红细胞裂解液、乳汁、精浆、胸腹水以及植物样本。
https://www.cloud-clone.cn/topic/201805141347467275.html
Q11. 不同指标的试剂盒的稀释液、TMB、终止液是否可以混用？
A11. 洗液、TMB、终止液可以混用。其它试剂不能混用，推荐使用试剂盒中配套的试剂。
Q12. 是否有ELISA操作视频供参考？
A12. 操作视频如下：
双抗夹心ELISA实验操作视频
链接：https://mp.weixin.qq.com/s/DI8DiNDZAo8Wr5ZMtUtJjQ
竞争抑制ELISA实验操作视频
链接：https://mp.weixin.qq.com/s/IQGa3twNZ9MsXJrgDbsggg
小样本ELISA实验操作视频
链接：https://mp.weixin.qq.com/s/AmjiP1ooc0WKQtK-x-4-zQ
快捷型ELISA实验操作视频
链接：https://mp.weixin.qq.com/s/LOl7jO1vyo271ozBhSo_HA