做通路研究?TGF-β1活性蛋白安排上!

转化生长因子β1(TGF-β1)是转化生长因子β超家族中一个多功能的细胞因子,在哺乳动物组织中广泛表达,对维持组织稳态至关重要。它最初以潜伏复合物的形式分泌,需经蛋白酶或整合素等激活后才能与细胞表面的TGF-β受体结合,进而启动下游的SMAD信号通路(经典通路)或非SMAD通路(如MAPK、PI3K通路)。TGF-β1的功能具有显著的上下文依赖性:在正常上皮细胞和早期癌变阶段,它主要发挥肿瘤抑制作用,通过诱导细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(如p15和p21)来强制阻滞细胞周期于G1期,从而抑制细胞增殖。然而,在肿瘤进展的晚期,癌细胞常克服其生长抑制效应,此时TGF-β1转而促进肿瘤的恶性进展,它通过诱导上皮-间质转化(EMT)增强癌细胞的侵袭与迁移能力,并刺激血管生成、抑制免疫监视,为肿瘤转移创造有利的微环境。此外,TGF-β1在伤口愈合、免疫调节(特别是诱导调节性T细胞的分化和抑制效应T细胞的活性)以及纤维化疾病(如肝、肺、肾纤维化)中扮演核心角色,其信号通路的失调与自身免疫病、癌症和纤维化等多种病理过程密切相关。

○ 产品货号:APA124Hu01

○ 结合活性验证
研究表明TGF-β1可与TGF-β受体1、核心蛋白聚糖(Decorin)、潜伏转化生长因子β结合蛋白1(LTBP1)等分子相互作用。为此,我们通过ELISA结合实验检测了重组人TGF-β1与重组人LTBP1的结合能力。简要步骤如下:将TGF-β1用含0.01%BSA(pH 7.4)的PBS缓冲液进行梯度稀释,取100μL稀释样品加入LTBP1包被的微孔板中,每个浓度设双复孔,37℃孵育2小时。弃液后使用PBST洗涤,加入抗LTBP1多克隆抗体37℃孵育1小时,再次弃液并洗涤3次。加入HRP标记的二抗孵育后,经3次洗涤,加入底物溶液37℃显色15-25分钟。最终每孔加入50μL终止液,立即于450nm波长下检测吸光度。如图1所示,TGF-β1与LTBP1的结合活性呈现剂量依赖性效应。
○ 结果展示
Figure 1. The binding activity of TGF-β1 with LTBP1.