武汉云克隆科技股份有限公司

基于流式荧光法的多因子检测技术是在不同颜色或大小的编码微球上包被不同的特异性抗体，以达到单个样本可同时检测多个靶标因子，从而实现高通量的蛋白定量技术。云克隆公司有十多年的蛋白、抗体和ELISA试剂盒的研发经验，通过采用和ELISA一致的抗体对筛选和试剂优化体系，在此基础之上开发出了更高标准和更高性能的多因子检测试剂盒（Multiplex Assay Kit），力求为客户提供更便利更全面的分析工具。多因子检测试剂盒自上市以来备受科研工作者的青睐，但由于和ELISA的操作方法大有不同，大家在使用过程中可能会遇到各种操作方面的问题，尤其是样本磁珠读数异常的问题较为常见。本期我们整理出可能原因和处理建议供大家参考：

1. 样本中的脂质、胶体或沉淀物等导致磁珠聚集和沉淀：

1）所有样本在使用前建议再次4℃离心20-30分钟，转速10,000×g。离心后取上清进行检测。冷冻样本建议解冻后按照上述方法再次离心后取上清检测。再次离心的原因是为了除去可能存在的任何碎片、脂质和细胞等杂质。这些杂质可能会在样本和磁珠孵育的过程中造成磁珠聚集和沉淀，从而影响最终的磁珠读数。尤其是针对血浆样本，细胞或组织裂解液或其他有粘性或者明显含有脂质、碎片的样本类型；

2）对于某些粘性物质含量较大或颗粒物含量较多的样本，可能需要重复离心2~3次才能获得完全澄清的上清液，这对多因子检测至关重要；

3）样本和磁珠一起孵育的过程中需保证充分振荡，避免磁珠因振荡不足结块，导致洗板不充分或者读数时无法获取足够的磁珠；

4）组织匀浆类样本和磁珠反应时，建议覆膜室温（18-25℃）避光振荡反应2h或者4℃过夜，效果会优于37℃避光振荡1.5h。4℃震荡孵育过夜后需先在室温下振荡1h之后再进行后续步骤，以避免孵育时间太久和低温导致的磁珠凝结；

5）溶血样本中的细胞碎片等其它杂质太多会导致磁珠凝结，另外，红细胞裂解释放的血红蛋白等物质会影响检测结果，溶血样本不建议进行检测。

2. 磁珠保存不当造成读数异常：

磁珠需4℃避光保存，不可置于-20℃冷冻保存或室温保存，低温和长期室温会影响磁珠的性能，导致结合效率降低，影响检测结果。

3. 磁珠在加入板孔前没有完全悬浮，导致加入板孔中的磁珠数不足或磁珠在板孔间的均一性较差影响最终检测结果：

预混合磁珠使用前，请用涡旋混合仪轻柔震荡防止磁珠沉降。加入板孔中时请保持预混磁珠处于悬浮状态。检测过程中预混合磁珠需避光。

4. 洗板过程中由于洗板操作不当造成的磁珠丢失：

1）请使用合适的磁力架，需保证96孔板牢固吸附在磁力架底部，洗板过程中请保持96孔板在磁力架上。建议手动洗板，即用单通道或多通道移液器小心将板孔内液体移除，残留在板孔内的少量液体无需吸干，更不要在纸上拍打酶标板；

2）若使用自动洗板机进行洗板，请调整好吸液针和96孔板之间的高度，以防吸液针触及板孔底部将磁珠吸出。请在熟练使用自动洗板机之后再进行正式实验。

5. 读数之前没有充分悬浮板孔中的磁珠，导致进样针堵塞或吸取的磁珠不足：

每次使用前请充分清洁进样针，调整好进样针和板孔之间的高度。同时，在读数前请充分振荡96孔板，使板孔中的磁珠悬浮，可借助涡旋振荡仪振荡或者移液器反复吹打使磁珠充分悬浮，必要时也可进行超声处理使磁珠分散。

6. 仪器使用或设置不当造成磁珠读数异常：

仪器在使用之前需进行校准和验证。针对不同的仪器需要调整进样针的高度，如有必要可向厂家咨询仪器设置参数。

云克隆多因子试剂盒操作视频详见:

多因子检测试剂盒（Multiplex Assay Kit）磁珠读数异常原因及解决方案

多因子试剂盒常见问题原因及解决方案总结：

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