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蛋白活性实验-细胞迁移侵袭实验
查看详情细胞transwell 迁移侵袭实验方案一、实验目的：主要用于趋化因子家族或者某些补体以及某些具有趋化活性的蛋白活性检测。二、实验仪器：倒置显微镜酶标仪 超净工作台 CO2培养箱三、相关试剂、耗材：24孔transwell小室 胎牛血清 DMEM/1640培养基 结晶紫 基质胶 四、实验步骤：A. 细胞迁移1 . 将细胞消化，终止后离心弃去培养液，用 PBS 洗 1-2 遍，用无血清培养基重悬。调整细胞密度至 1~5×105左右，每孔100-200μl加入小室上室中。2.下室加入用无血清培养基按5-10倍梯度稀释的待检测蛋白，每孔500μl。对于贴壁细胞，下室可加入含1-2% ......
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蛋白质印迹（Western Blot）实验操作流程
查看详情1.制胶1）试剂浓缩胶缓冲液：1M Tris-HCl, pH 6.8, 0.4% SDS分离胶缓冲液：1.5M Tris-HCl, pH 8.8, 0.4% SDS丙烯酰胺储存液：29%丙烯酰胺+1.0%亚甲双丙烯酰胺10%过硫酸铵TEMED(N，N，N‘，N’-四亚甲基乙二胺)电泳缓冲液：0.025M Tris Base, 0.192M Glycine, 0.1% SDS考马斯亮蓝凝胶染色液：0.2%考马斯亮蓝R-250，30%甲醇，10%乙酸考马斯亮蓝凝胶脱色液：30%甲醇，10%乙酸2）设备微型凝胶装置：Bio-Rad Mini-Protean 3 Dodeca Cell电源：Bio-Rad PowerPac HC梯度凝胶仪：Bio-Rad Model 485 Gradient Former3）实验操作在烧杯中按如下......
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酶联免疫吸附测定实验（ELISA)常见样本处理方法
查看详情酶联免疫吸附测定实验（ELISA）是一种快速、灵敏、准确可靠的定量分析方法，样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用。刚开始接触ELISA的时候，会遇到一些棘手的问题，容易导致实验出现这样那样的状况。用于ELISA检测的常见样本类型包括血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等。这些样本的收集时间、处理方法和保存方式都会影响ELISA实验的结果。下面我们将逐一介绍常见的样本处理方法，供研究者参考。一、血液样本血液采取后应尽快进行处理，使血清（浆）从与血细胞接触的全血中分离出来。血清与血浆......
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实时荧光定量PCR实验操作流程
查看详情一、实验器材及试剂1、实验器材多样品研磨珠均质仪台式高速冷冻型微量离心机荧光定量PCR仪超净工作台分光光度计离心管TIP头2、主要实验试剂及耗材RNA提取液三氯甲烷异丙醇无水乙醇HyPure TMMolecular Biology Grade WaterRevertAid First Strand cDNA Synthesis KitFastStart Universal SYBR Green Master(Rox)引物75%乙醇：HyPure TMMolecular Biology Grade Water配制离心管、TIP头均购湿热灭菌40min，干燥。二、荧光定量PCR实验步骤1、总RNA抽提（枪头和离心管均经过湿热灭菌，无RNA酶）1）取匀浆器，加入1ml的Trizol Reagent，......
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蛋白活性实验-细胞增殖/抑制实验方案
查看详情细胞增殖/抑制实验方案一、实验目的：通过检测待测蛋白对某种细胞的有促进增殖或抑制增殖的作用来评价该蛋白的生物活性。二、实验仪器：倒置显微镜酶标仪 超净工作台 CO2培养箱三、相关试剂、耗材：96孔细胞培养板 胎牛血清 DMEM/1640培养基 CCK8试剂盒四、实验步骤：1 .将待测细胞消化后，用10% DMEM/1640培养基重悬稀释，按2000-5000 cells/孔接种到96孔板中，每孔100μl。可根据细胞自身生长状态适当调整接种浓度，抑制实验可多接种一些。当细胞贴壁后，换无血清的DMEM/1640饥饿过夜。2.将孔内无血清培养基吸出弃掉，加入用低浓度......
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免疫层析（胶体金）实验操作流程
查看详情1. 胶体金标记抗体的制备。将检测抗体加入到胶体金溶液中，搅拌均匀，静置0.5-24小时，逐滴加入牛血清蛋白，搅拌0.5－24h，静置过夜。离心，弃去上清液。得到胶体金标记抗体。2. 喷金。将胶体金标记抗体喷在结合垫上，37oC抽风烘干5－24h，得到喷金后的结合垫。3. 包被C线。C线即是质控线，用二抗包被。4. 包被T线。T线是检测线，用包被抗体包被。37oC抽风烘干2－24h, 得到包被后的硝酸纤维素膜，浸泡在封闭液中，37oC抽风烘干2－24h。5. 组装。将聚氯乙烯底板、样品垫、步骤2.2所得喷金后的结合垫、步骤3&4处理好的硝酸纤维素膜和......
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双抗夹心ELISA实验操作流程
查看详情1. 酶标板包被抗体流程：1.1按说明书推荐的比例稀释包被抗体，或者设计预实验用倍比稀释的方式稀释包被抗体，酶标孔中加100ul包被抗体包被。酶标板加上覆膜，4oC温育过夜或37oC温育2小时。1.2弃去孔内液体，每孔用350μL的洗涤液洗涤，浸泡1-2分钟。在吸水纸上轻拍酶标板来移除孔内所有液体。此过程也可采用喷射瓶，多道移液器 或自动洗板机来完成。1.3每孔加入200ul封闭液封闭，37oC温育1.5小时。1.4 弃去孔内液体，甩干，洗板1次，方法同步骤1.2。酶标板包被抗体完成。2. 实验流程2.1按说明书推荐的方法稀释成不同浓度的标准品工作......
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免疫组织化学石蜡切片实验操作流程
查看详情1. 烘片：60℃烘片0.5-2小时。2. 脱蜡水化：烘片结束后，石蜡切片依次置于以下试剂中：1）二甲苯I：30 min2）二甲苯II：30 min3）100%乙醇：10 min4）95%乙醇：10 min5）80%乙醇：10 min6）70%乙醇：10 min7）自来水冲洗10 min3. 抗原修复-微波炉抗原热修复法（可选）：将组织切片转移到沸腾的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加热一分钟，停止加热并静置于微波炉中10min。然后再低火加热3-4分钟，停止加热，使EDTA-Tris 溶液在室温自然冷却。4. PBST漂洗3次：去除残留并浸泡在PBST中，在摇床中以40 RPM漂洗5 min，重复3次。5. 阻......