双抗夹心法CLIA检测原理

双抗夹心化学发光法(CLIA)是将双抗体夹心法与化学发光检测技术结合在一起的检测方法。它的一般实验步骤包括:将特异性针对待测抗原的抗体包被于 96 孔微孔板中,制成固相载体;向微孔中分别加入标准品或标本,使待测抗原与连接于固相载体上的抗体结合;此后加入生物素化的针对待测抗原的抗体,形成夹心;再将未结合的生物素化抗体洗净后,加入 HRP 标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入鲁米诺发光底物,并用光子计数器,读出各孔的相对光度值(RLU)。此法与双抗夹心ELISA法的区别在于采用了增强型的ECL发光体系作为发光底物试剂来实现检测过程。由于其灵敏度高,检测范围跨度大,且不存在放射性污染,该方法被认为是最有前途的实验室诊断方法之一。

原理图如下: