• 竞争抑制ELISA实验操作流程

    1、酶标板包被抗体流程:1.1按说明书推荐的比例稀释包被抗体,或者设计预实验用倍比稀释的方式稀释包被抗体,酶标孔中加100ul包被抗体包被。酶标板加上覆膜,4℃温育过夜或37℃温育2小时。1.2弃去孔内液体,每孔用350μL的洗涤液洗涤,浸泡1-2分钟。在吸水纸上轻拍酶标板来移除孔内所有液体。此过程也可采用喷射瓶,多道移液器 或自动洗板机来完成。1.3每孔加入200ul封闭液封闭,37℃温育1.5小时。1.4 弃去孔内液体,甩干,洗板1次,方法同步骤1.2。酶标板包被抗体完成。2、实验流程2.1按说明书推荐的方法稀释成不同浓度的标准品工作液......

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  • 竞争抑制ELISA试剂盒标曲拟合及样本测算方法

    竞争抑制 ELISA ,其主要原理是将标本中的靶分子和一定量的靶分子标记物竞争与酶标板上固相抗体结合。 标本中靶分子量愈多,结合在酶标板上的靶分子标记物愈少,最后的显色也愈浅,也就是说,显色的深浅与样本中靶分子含量成负相关。小分子类激素、小分子药物等 ELISA 测定多用此法。这是因为小分子半抗原或多肽半抗原,缺乏两个以上的抗体结合位点,无法形成双抗体夹心结果,对用竞争抑制法定量检测。如何分析检测数据测算结果呢?在这里为大家推荐一种方法,用EXCEL 软件即可完成结果测算。1、标准曲线拟合方法以云克隆公司的去甲......

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  • 蛋白活性实验-SCF活性蛋白

    蛋白活性实验-SCF活性蛋白干细胞因子(SCF),也称为肥大细胞生长因子(MGF)和铁因子(SLF),在造血、精子和黑色素生成中起着重要作用。SCF已被证明可以刺激TF-1细胞的增殖。实验方法:测试这种效果,将TF-1细胞被接种在96 孔板上,密度1 x 104细胞/孔,重复3孔。在不同浓度SCF中37°C孵育72 h,检测不同浓度的SCF。在倒置显微镜下观察细胞的生长,细胞计数以细胞计数(CCK-8)测定细胞增殖。简要来说,每孔添加10µl CCK-8,于37°C孵育1 - 4小时,然后在450 nm处测量吸光度。实验结果:用倒置显微镜观察添加SCF孵育72h后,TF-1细胞的细胞增......

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  • 蛋白活性实验-TNF-a活性蛋白

    蛋白活性实验-TNF-a活性蛋白TNF-a是内源性的热原,能够引起发热、凋亡细胞死亡、炎症和抑制肿瘤发生。据报道,TNF-a可以抑制A549细胞的增殖和诱导凋亡,在刺激后细胞上清液中IL-1的浓度会增加。实验方法:因此,A549细胞在DMEM孵化TNFa(1 ng / mL,10 ng / mL)2 h,4 h,8 h,24小时、48小时,然后细胞被倒置显微镜观察,IL-1β被ELISA检测细胞上清液中。实验结果:用TNF-a (10ng/mL)孵育72h后观察细胞凋亡(见图一)。A BFigure 1. Effect of TNF-aon A549 cells.(A)A549 cells cultured in DMEM, stimulated with 10ng/mL TNF-afor 72h; (B......

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  • 蛋白活性实验-CD14活性蛋白

    蛋白活性实验-CD14活性蛋白CD14作为一种共受体(连同toll样受体TLR 4和MD-2)用于检测细菌脂多糖(LPS)。CD14只能在脂多糖结合蛋白(LBP)存在的情况下结合LPS。虽然LPS被认为是其主要的配体,但CD14也能识别其他的与病原体相关的分子模式,如lipoteichoic acid。此外,脂多糖结合蛋白(LBP)已被鉴定为CD14的中间体,因此进行了ELISA结合检测,以检测重组人CD14和重组人LBP的相互作用。活性实验:用含0.01%的BSA 的PBS (PH7.4)稀释CD14。将100μl样本转移到LBP预包被板中37℃孵育2 h。用抗CD14多抗孵育1小时后用PBST冲洗,,然后吹吸,冲洗3......

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  • 免疫组织化学——样本处理方法

    免疫组织化学用于观察标本的染色结果对靶抗原抗体进行鉴定和定位,其标本制备非常重要。在制作标本过程中,需保持抗原的完整性,在染色、洗涤包埋等过程中避免发生溶解和变性,同时防止扩散至邻近细胞或组织间隙中。组织材料的处理是获得良好免疫组织化学结果的前提,活体组织,各种体液及穿刺液和细胞都可以用于免疫组化分析,针对不同的标本类型可以选择不同的制备方法。活体组织常选用石蜡切片和冰冻切片处理,而体液、穿刺液及细胞样本则选用涂片方式处理。对于细菌菌落或尸体病变组织,可将新鲜切面压印于玻片上做成印片。我们......

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  • 免疫荧光实验操作流程

    1.烘片:60℃烘片0.5-2小时。2.脱蜡水化:烘片结束后,石蜡切片依次置于以下试剂中:1)二甲苯I:30 min2)二甲苯II:30 min3)100%乙醇:10 min4)95%乙醇:10 min5)80%乙醇:10 min6)70%乙醇:10 min7)自来水冲洗10 min3.抗原修复-微波炉抗原热修复法(可选):将组织切片转移到沸腾的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加热1min,停止加热并静置于微波炉中10min。然后再低火加热3-4min,停止加热,使EDTA-Tris 溶液在室温自然冷却。4.PBST漂洗3次:去除残留并浸泡在PBST中,在摇床中以40 RPM漂洗5 min,重复3次。5.阻断内源过......

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  • IHC全扫图配套软件以及使用说明

    1)双击看图软件“CaseViewer_2.1__RTM_v2.1.2.69595”,按照提示进行安装;2)安装结束后会出现三个快捷方式,均要保留(不能删除);3)双击绿色图标"CaseViewer"快捷方式,出现一个界面,然后点击“Local computer”;4)找到“computer”通过路径找到目标切片,双击即可看见图片,通过滚动鼠标中间的滑轮来调整图片放大倍数,然后点击即可截取屏幕所显示的图片。

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