总蛋白定量方法简介及优缺点
蛋白质定量是生物学实验不可缺少的部分，该技术被广泛的用于多个领域和行业，包括生物学科、食品检验、临床检验、疾病诊断等。在实际应用操作过程中，对样本中蛋白质进行准确可靠的定量分析，是常用且重要的工作。尽管目前有多种总蛋白定量的方法，但是由于蛋白质种类繁多，结构复杂，分子量差异大，且功能各异，暂无理想而通用的蛋白质定量分析方法。现介绍目前常用的定量方法以及优选点，实验工作者可根据实验需要，选取合适的定量方法。
蛋白定量法可分为以下两大类，化学检测法，包括福林-酚法（Lowry）、二喹啉甲酸法（BCA）、凯氏定氮法（Kjeldahl）、双缩脲法（Biuret）、考马斯亮蓝法（Bradford）；光学检测法，包括紫外光检测和荧光检测等。现简单介绍常用的二喹啉甲酸法（BCA法和紫外光检测法。
1.. 二喹啉甲酸法
原理：Lowry法的改进方法，原理为蛋白质分子中肽键与二价铜离子形成络合物，并还原成亚铜离子（一价铜）。BCA在碱性条件下能与亚铜离子形成稳定的紫蓝色复合物，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，复合物在562nm处有高的光吸收值。蛋白浓度范围约在5-200ug/ml。原理图如下：
优点：准确灵敏（微量检测的灵敏度可达0.5ug/ml），测定快速简便，经济实用。干扰物质少，试剂及其形成的显示复合物稳定性好，检测不同蛋白质分子的变异系数较小。
缺点：⑴对去污剂敏感：TWEEN，Triton X-100，SDS。⑵蔗糖，尿素，铵盐，EDTA影响测定结果。⑶最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品结果差异较大，无可比性。
2.紫外光检测
原理：蛋白质分子中酪氨酸，苯丙氨酸和色氨酸残基使其在280nm处具有紫外吸收，其吸光度值与苯环中共轭双键的含量成正比,检测最低浓度可达到10ug/ml。
优点：简便，灵敏，快速，不消耗样品。测定后能回收。
缺点：⑴测定蛋白质含量的准确度和专一性较差。
⑵干扰物质多，若样品中含有嘌呤，嘧啶和核酸等能吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰。
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