酶联免疫吸附测定实验（ELISA)-特殊样本处理方法
酶联免疫吸附测定实验（ELISA)-特殊样本处理方法
之前的专题中我们给大家介绍了常规样本诸如血清，血浆，组织细胞等的处理方法。这一次我们再跟大家普及一些在ELISA检测中碰到特殊样本的处理方式。
v 痰液
选择痰液中较为粘稠部分称重，加两倍于痰量的0.1%DTT(二硫苏糖醇)37摄氏度恒温水浴振荡5分钟，再加入两倍于痰量的PBS缓冲液继续振荡15-20分钟，150目的金属丝网过滤，1,000×g离心10分钟吸取上清液-20oC或-80oC冷冻保存。
v 肺泡灌洗液
1,000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC保存，但应避免反复冻融。
v 唾液
用唾液样本采集管收集样本，然后于2-8oC 1,000×g离心15分钟，取上清即可检测，或分装后于-20oC或-80oC保存。避免反复冻融。
注意：唾液一般饭后半小时内不易采集，因为刚进食的唾液中富含唾液淀粉酶，最好空腹时段采集。
v 红细胞裂解液：
1）将全血于1,000×g离心20分钟，弃上清收集细胞。
2）将收集的细胞用预冷的PBS（pH 7.0-7.2）洗涤三次。
3）用预冷的PBS重悬细胞，放于-20oC冷冻。然后融化细胞，轻轻混合。反复冻融三次。
4）于2-8oC 5,000×g离心10分钟，除去细胞碎片。
5）取上清即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC保存，尽量避免反复冻融。
v 乳汁
将标本在2-8oC 10,000×g离心15分钟，收集水样成份，每次离心两次以上，重复3次即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC保存，避免反复冻融。
v 精浆
精液标本收集于无菌容器中，室温或37oC水浴箱中液化。待精液完全液化后，将精液 4,000 rpm离心10 分钟分离精浆，即可做ELISA。
v 胸腹水
为防止标本采集时出现凝块、细胞变性、细菌破坏自溶等，常规及细胞学检查胸腹水宜用EDTA-K2 抗凝收集，生化标本宜用肝素抗凝收集。收集后即刻离心，2,500r/分钟离心5分钟。取上清即可用于检测，或将上清置于-20oC或-80oC保存。
除了动物来源的样本，还有植物样本在检测之前也需要进行相应的处理。在这里我们选取了2种植物样本收集处理方法，以供参考：
v 植物样本中提取化学分子
1) 取新鲜材料或贮存材料（用100％甲醇固定，放置-10摄氏度冰箱中至待测时）1g，剪碎，加入6ml预冷的80％甲醇溶液，匀浆5分钟.
2) 匀浆液在4摄氏度下振荡（或搅拌）24h，过滤。
3) 残渣再用2ml甲醇液振荡1h。反复二次，滤液混合。
4) 将滤液在旋转蒸发器上干燥减压蒸发（36～38摄氏度）至2ml。
5) 再加入1ml石油醚提取部分色素，弃掉石油醚层，取下层甲醇液层。
6) 继续减质浓缩至水溶液。在此水溶液中含有IAA、ABA、GA和CTK等。
v 植物样本中蛋白质提取方法
1）根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当调整加入量），准备提取液放在冰上。
2）把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3）用离心机离心8，000rpm40分钟（4oC）或11100rpm20分钟（4oC）
4）提取上清夜，样品制备完成。
高品质的试剂，精确的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。其中正确的操作不仅仅是指实验操作，样本的处理也是至关重要的。