竞争抑制ELISA试剂盒标曲拟合及样本测算方法
竞争抑制 ELISA ，其主要原理是将标本中的靶分子和一定量的靶分子标记物竞争与酶标板上固相抗体结合。 标本中靶分子量愈多，结合在酶标板上的靶分子标记物愈少，最后的显色也愈浅，也就是说，显色的深浅与样本中靶分子含量成负相关。小分子类激素、小分子药物等 ELISA 测定多用此法。这是因为小分子半抗原或多肽半抗原，缺乏两个以上的抗体结合位点，无法形成双抗体夹心结果，对用竞争抑制法定量检测。
如何分析检测数据测算结果呢？在这里为大家推荐一种方法，用EXCEL 软件即可完成结果测算。
1、标准曲线拟合方法
以云克隆公司的去甲肾上腺素(NE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)（CEA907Ge）为例，进行详细讲解。与双夹心法 ELISA 不同的是，竞争抑制 ELISA 的标准品吸光度值并不需要减去阴性对照孔的本底吸光度值。以标准品的各孔吸光度值为 x 轴，标准品各浓度取 Log10 后的值为 y 轴作 XY 散点图，得到一条 5 点曲线，其中 X 轴为吸光度（Optical Density），Y 轴为浓度的对数值（Log. of Concentration）。
图1为CEA907Ge的一次实验结果，包括标准品和部分样本测值。
图1 标准品和部分样本测值
CEA907Ge试剂盒的检测范围是61.7-5000ng/ml。将标准品各个浓度孔依图2罗列在第1列，第2列和第3列为各浓度标准品测得的O.D.值，第4列为O.D.值平均值，第5类为浓度的对数值（标准品各浓度取对数值）。详见图2。
图2 标准曲线
选定图2黄色区域，点击菜单栏“插入”后点击“插入散点图”（见图2），得到 5 点组成的散点图（图3）。
图3 散点图
在散点图（图3）的5点中任选一点以右键打开，选择”添加趋势线(R)”，图表上右会弹出一个对话框。在“趋势线选项”点击“趋势线”，选择“多项式”，并将“顺序”设定为 2 。最后，勾选“显示公式(E)”和“显示 R 平方值(R)”（如图 4 所示），便会出现标准曲线的对应公式及 R^2 值（如图 6 所示）。
图 4 标准曲线示例图
2、样本浓度测算
如图5，将样本O.D.值取平均值（绿色列）作为X带入公式中，得到Y值,作以10为底的指数运算，若样本原液检测，测算的Y值为样本浓度，若样本稀释后检测，测算的Y值乘以稀释倍数，为样本的浓度（紫色列）。
图 5 样本浓度测算