瘦素(LEP)活性蛋白

瘦素(leptin,LEP)是一种由白色脂肪细胞产生的激素,可通过抑制饥饿来帮助调节能量平衡。其前体由167个氨基酸组成,在血液中被切除N端信号肽,形成Leptin(16kD)。Leptin最为重要的生物学效应是通过下丘脑含神经肽的神经元和神经肽受体介导的,可抑制食欲,减少能量摄取,增加能量消耗以及抑制脂肪合成。尽管调节脂肪储存被认为是Leptin的主要功能,但它也在生长、生殖等生理过程中发挥作用。除了脂肪细胞和下丘脑细胞,在全身各个组织细胞中都能发现瘦素受体。瘦素和机体系统的病理生理相关性正逐步被人们了解发掘。


实验原理:Hexokinase 3,White Cell(HK3)已被鉴定为LEP的相互作用因子。本实验通过结合ELISA检测重组人LEP和重组HK3蛋白的相互作用。


实验方法:用含有0.01% BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀释LEP。将100μL样品移入HK3蛋白预包被酶标板中,37℃孵育2小时。弃去孔内液体,用PBST洗涤。除去洗液,加入抗LEP-pAb孵育1小时,弃去孔内液体,用PBST洗板3次。用辣根过氧化物酶标记的二抗孵育后,弃去孔内液体,用PBST洗板3次。加入底物溶液后,在37℃下孵育15-25分钟。最后,向孔中加入50μL终止液,立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度。


实验结果:LEP和HK3的结合活性如Figure 1所示,结合活性呈剂量依赖性。 


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APA084Hu01 Active Leptin (LEP)