儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT）活性蛋白
儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)活性蛋白
儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT）是几种降解儿茶酚胺（如多巴胺、肾上腺素和去甲肾上腺素）、儿茶胆固醇以及具有儿茶酚结构的各种药物和物质的酶之一。COMT有两种亚型：可溶性短型（S-COMT）和膜结合长型（MB-COMT）。COMT在内源性儿茶酚胺神经递质、儿茶酚雌激素和异生分子的分解代谢中起重要作用。其通过向儿茶酚胺引入一个甲基，而导致儿茶酚胺神经递质（多巴胺、肾上腺素和去甲肾上腺素）的失活。儿茶酚胺甲基化的供体是S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。任何具有儿茶酚结构的化合物，如儿茶胆固醇和含有儿茶酚的类黄酮，都是COMT的底物。此外，UDP葡萄糖醛酸转移酶2家族多肽B1（UGT2B1）已被鉴定为COMT的相互作用因子，因此采用结合ELISA法检测重组人COMT与重组人UGT2B1的相互作用。
实验目的: UDP葡萄糖醛酸转移酶2家族多肽B1（UGT2B1）被鉴定为COMT的相互作用因子，因此采用ELISA法检测重组人COMT与重组人UDP葡萄糖醛酸转移酶2家族多肽B1（UGT2B1）的相互作用。
实验步骤： 用含有0.01%BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀释COMT。将100uL样本移入UGT2B1蛋白预包被的酶标板中，37℃反应2小时。弃去孔内液体，用PBST洗板3次。加入抗COMT的pAb后孵育1小时，弃去孔内液体，用PBST洗板3次。再加入HRP标记的二抗孵育后，弃去孔内液体，用PBST洗板3次。加入底物溶液，在37℃孵育15-25分钟。最后，向孔中加入50µL终止液，并立即在450nm下读数。
实验结果： COMT与UGT2B1的结合活性如Figure 1所示。
实验结论： COMT可与UGT2B1结合，且这种作用呈剂量依赖性。
云克隆儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT）活性蛋白货号：APJ365Hu01