神经氨酸酶(NEU)活性蛋白

神经氨酸酶(Neuraminidase,NEU)是一种能分解(切断)神经氨酸糖苷键的糖苷水解酶。人类基因组中发现至少4种哺乳动物唾液酸酯酶同源物(见NEU1、NEU2、NEU3、NEU4)。体内缺乏神经氨酸酶,导致低聚糖在体内细胞中贮积,会引发唾液酸贮积症。在细胞内,组织蛋白酶A(Cathepsin A,CTSA)残基在溶酶体内与β-半乳糖苷酶(Galactosidase Beta,GLb)和神经氨酸酶NEU组成高分子量复合物。CTSA与这些糖苷酶的相互作用对它们进入溶酶体的正确途径是必须的,并防止它们发生溶酶体内水解。


实验原理:神经氨酸酶NEU可与CTSA结合。本实验通过结合ELISA检测重组人NEU和重组CTSA蛋白的相互作用。


实验方法:用含有0.01% BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀释NEU。将100μL样品移入CTSA蛋白预包被酶标板中,37℃孵育2小时。弃去孔内液体,用PBST洗涤。除去洗液,加入抗NEU-pAb孵育1小时,弃去孔内液体,用PBST洗板3次。用辣根过氧化物酶标记的二抗孵育后,弃去孔内液体,用PBST洗板3次。加入底物溶液后,在37℃下孵育15-25分钟。最后,向孔中加入50μL终止液,立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度。

 

实验结果:NEU和CTSA的结合活性如Figure 1所示,结合活性呈剂量依赖性。


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APB611Hu02  Active Neuraminidase (NEU)