蛋白/抗体的常用标记方法介绍
查看详情为研究蛋白的性质、含量、结构与功能，以及为了方便对抗原抗体特异性结合的实验现象进行观察和检测，通常会选择利用一些易测定又具有高度敏感性的物质作为标记物标记抗原，然后通过检测这些标记物的增强放大效应而产生的颜色变化、光谱变化等来达到研究目的。即利用抗原中氨基酸残基的特殊理化性质，在特定的条件下使蛋白/抗体与标记物结合，形成蛋白/抗体标记物。标记抗原原理示意图如下：标记蛋白一般可采用酶标记、生物素标记、荧光标记以及C13和N15全蛋白标记等方式。标记抗体一般可采用酶标记、生物素标记、荧光标记以及胶体金......
荧光抗体染料大集合
查看详情染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色，然后进行观察。随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展，许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛，并逐步显示出明显的优越性。下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类：1. 荧光素类染料，包括异硫氰酸荧光素(FITC)、 羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TE......
昆虫细胞表达系统
查看详情昆虫细胞表达系统是四大表达系统（昆虫细胞、细菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统）之一。昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体（Bacmid）上，通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。杆状病毒是一类闭合环状双链病毒，病毒粒子呈杆状，以昆虫为主要宿主。杆状病毒还是一种出芽型分泌性病毒粒子，在感染细胞后能迅速在培养细胞中水平传播而保持细胞在相......
小分子半抗原之载体偶联II
查看详情在上期专题中我们讲到小分子半抗原的结构修饰，这期我们将展开讲述载体蛋白的选择以及偶联方法。载体蛋白是一种自身就能引发免疫反应的大分子，许多不同种类的载体蛋白与小分子偶联后可制备成完全的抗原。常用的载体包括牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、牛甲状腺球蛋白等。对于载体蛋白的选择，主要涉及其溶解性、大小、偶联基团、免疫原性、成本价格等因素。目前市面上应用最为广泛的是牛血清白蛋白BSA(三维结构如图1)，主要是由于BSA化学性质稳定，不易变性，分子内含有多种氨基，且赖氨酸含量高，廉价易得。但BSA由于在一......
小分子半抗原之结构修饰
查看详情要制备小分子半抗原的抗体，首先对小分子的结构有一定的要求，需要一定的复杂性或刚性，如含有苯环、杂环基团或者有分支结构，否则难以产生抗体或产生的抗体效价也较低。一些小分子半抗原若具有活性基团，如-COOH、-NH2、-OH等，可以直接跟载体蛋白进行偶联，制备完全的人工抗原（如偶联原理图1）。如果半抗原没有可直接与载体共价连接的基团，或虽有活性基团但这些基团对维系半抗原的免疫特性和特征结构十分重要，或直接与载体蛋白连接后半抗原的特征结构易受载体的局部微化学环境或空间位阻的干扰影响机体的免疫反应，则必须要对......
大肠杆菌无细胞表达系统
查看详情传统的大肠杆菌表达系统经过不断的改进优化，具有生产周期短、效率高、成本低等一系列的优点，但是也存在系统自身的缺陷性，除了无法完成真核蛋白的折叠与修饰外，至今人们利用该系统仍无法解决膜蛋白以及一些毒性蛋白表达，严重制约着大肠杆菌表达系统的应用。为弥补原核表达系统的不足，人们常用真核表达系统来表达重组蛋白，但是真核表达系统步骤繁琐、周期长、蛋白产量低、费用高等一系列问题，也给真核表达系统的推广应用设置了一个比较高的门槛。目前，随着人们对蛋白表达系统研究的不断深入，使得蛋白的无细胞表达从可能变成......
ELISA试剂盒精密度性能分析
查看详情精密度，表示在相同条件下，同一样本的重复测定值之间的符合程度，作为检测系统的基本分析性能之一，是评判检测系统有效性的评价基础。那么，如何测定检测ELISA试剂盒的精密度呢？ELISA试剂盒的精密度分为批内精密度和批间精密度。精密度用样品测定值的变异系数CV表示。。批内精密度：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值（Mean）及SD值。计算公式如下：批间精密度：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重......
CRISPR/Cas9和Argonaute基因编辑技术简介
查看详情随着科学技术的发展，人们对疾病认识的进一步深入，发现人类很多疾病的发病原因与基因突变有着密不可分的关系。那么如何去治疗这些疾病呢？人们自然想到了采用一些技术手段对突变的基因序列进行重新编辑，以期达到治愈的目的，这项技术就是基因编辑技术。基因编辑技术经过了以归巢酶，ZFN，TALEN等以蛋白质与DNA识别与切割为原理的第一代基因编辑技术的发展，人们对基因编辑技术的认识不断加深，但是由于第一代基因编辑技术操作步骤繁琐、基因编辑效率低下、基因编辑脱靶现象严重等问题，很难应用于生产实践。2003年，MIT小组首次利......