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Elisa常见样本的处理方法（二）
查看详情Elisa 是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法，样本的处理对于 Elisa 实验的成功有着举足轻重的作用。样本收集的时间、处理方法和保存都会 影响到 Elisa 实验的结果。上节我们介绍了血液（血清、血浆），组织匀浆、细 胞裂解液、细胞培养上清等常见样本的处理方法，这一节我们将会介绍皮肤组 织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴 道分泌物等特殊样本的处理方法，供研究者参考。1、痰液1）选择痰液中较为粘稠部分称重，加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇)， DTT 的主要作用是溶解粘液，......
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云克隆的改良式酵母表达系统
查看详情众所周知，在基因工程领域，常用的表达系统共有三种，包括：原核表达系统 (大肠杆菌 E. coli 表达系统)、酵母表达系统(P. Pichia 表达系统)和哺乳动物细胞表 达系统。原核表达系统由于操作简单、成本低廉、表达效率高等优点，被广泛应用 于外源基因的蛋白表达。但同时，原核表达体系也有一些自身的缺点，比如容易形 成包涵体，不能进行翻译后加工等等。为了尽量避免原核表达系统自身的不足，Cloud-Clone Corp.又另外开发建立了 酵母表达平台。酵母表达外源基因具有一定的翻译后加工能力，收获的外源蛋白质 具有一定程度上的折叠加工......
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ELISA试剂盒的稳定性试验
查看详情ELISA 试剂盒（简称试剂盒）的稳定性是指试剂盒在生产企业规定界限内保 持其特性的能力。根据实验的目的和条件不同，稳定性试验可分为加速稳定性试验 和长期试验。加速稳定性试验，通常在 37 度下进行，用于加快试剂盒中的生物试剂的化学 或物理变化速度考察试剂盒的稳定性。可对试剂盒在运输、保存过程中可能会遇到 的短暂的超常条件下的稳定性进行模拟考察，并初步预测试剂盒在规定的储存条件 下长时间的稳定性。取有效期内的试剂盒，在 37 度分别破坏 24 小时和 72 小时，检测试剂盒的回 收率、线性和精密度，判断试剂盒的有效性......
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竞争抑制ELISA对小分子定量检测的优势
查看详情通常意义上来说，小分子是指分子量很小的化合物，一般分子量小于 1000 道尔顿（Dalton，Da）。在生物学领域，常见的小分子包括：多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等；其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等； 以及医学检测中的激素等。由于小分子通常化学组分单一，化学结构简单且分子量小，所以不具备免 疫原的基本化学特性。因此，小分子直接免疫动物是不能激发免疫应答而获得 特异性抗体的，常用的免疫学检测方法也很难对其进行定量检测。现有的针对 小分子定量检测的方法主要为高效液相色谱法......
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竞争抑制ELISA标准曲线的拟合方法
查看详情众所周知，对于具有多个表位的抗原而言，双夹心 ELISA（Double Sandwich ELISA）可应用于目标抗原或抗体的定量检测。而对于小分子抗原或半抗原，因缺 乏可作夹心法的两个以上的结合位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定。此时， 可以采用竞争抑制法模式来检测其中靶分子的含量。竞争抑制 ELISA 又叫封闭 ELISA，其主要原理是将标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。 标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅，也就 是说，最终显色的结果与待检抗原或抗体的干扰程度成负相关。小分子激素......
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蛋白质印迹常见问题及解决办法
查看详情蛋白质印迹（Western Blot）是根据抗原抗体特异性结合的原理检测复杂样本 中的某种蛋白的方法。将混合抗原样本在凝胶板上进行单向或双向电泳，经过 PAGE 分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白 质，且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽 作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与或标记的第二抗体起反应，经过底物显 色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应 用于鉴定蛋白以及对蛋白进行定性和半定量分析。蛋白质印迹分为蛋白质......
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Elisa常见样本的处理方法
查看详情Elisa 是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法，样本的处理对于 Elisa 实验的成功有着举足轻重的作用。利用 ELISA 进行检测的样本类型包括常 见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的 皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精 液、阴道分泌物等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到 Elisa 实 验的结果。下面我们就常见的样本处理方法，供研究者参考。1、 血液样本血液采取后应尽快进行处理，使血清（浆）从与血细胞接触的全血中分离 出来。血清与......
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Elisa样本测值低的原因
查看详情ELISA 实验中，实验者经常会遇到样本测值低的问题，样本类型包括血清、 血浆、组织匀浆、细胞裂解液等。假设客户的操作完全正确，标准曲线良好， 这种情况样本测值低可从两方面进行分析：一是样本本身含量可被检测，但由 于实验操作等原因导致样本测值不在试剂盒检测范围内；二是分析物在样品中 本身浓度偏低。下面将从这两个方面来进行分析导致样本测值低的因素以及对 应的解决方案。1.样本本身含量可以被检测，有哪些原因导致测值低呢？1）试剂盒的保存试剂盒要按照规定的方法保存，实验者在购买试剂盒时请务必留心试剂盒 不同组......