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酸性 α- 葡萄糖苷酶-庞贝病的诊断金标准
查看详情酸性α- 葡萄糖苷酶 (Glucosidase Alpha, Acid, GaA)，为淀粉水解酶类的一种。它能催化多糖水解，产生α- D-葡萄糖。同时它也具有转糖苷作用，可将低聚糖中的α-1，4-糖苷键转化成α-1，6-糖苷键或其他形式的链接，从而得到非发酵性的低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等。当位于第17号染色体上编码酸性α-葡糖苷酶的基因突变，造成体内酸性α- 葡萄糖苷酶缺乏，糖原无法正常代谢，导致体内糖原在骨骼肌、心肌和平滑肌等肌肉组织内大量集聚，导致严重的神经肌肉病变。这种溶酶体贮积症，被称为庞贝病，也称为酸性α -葡糖苷酶缺乏症或II型糖原贮积......
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补体C3在血清血浆中的检测及应用
查看详情补体（Complement）主要分布在人和动物的体液和细胞表面，活化后有生物活性，并可介导免疫和炎症反应的一组蛋白质，又称为补体系统。补体系统由近40种成分组成，大部分都是糖蛋白。补体的固有成分有13类，调节蛋白有10类；补体受体10多种。补体不耐热，当温度达到56度，时间达到30分钟时大部分补体会失活。补体不易保存，冷冻干燥，保存时间相对长一些。补体第三组分（Complement Component 3，C3）是补体的核心成分，分子量为195000，由19号染色体C3基因编码。C3是血液中含量最大的补体成分，主要由巨噬细胞和肝脏合成。C3在补体经......
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MAPK级联激活信号通路
查看详情丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一组能被不同的细胞外刺激，如细胞因子、神经递质、激素、细胞应激及细胞黏附等激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。MAPK信号通路是利用逐级磷酸化过程将信号放大传至细胞核内，调节转录因子的活性，调控相应基因的表达，进而引起细胞反应的一类重要信号系统。MAPK级联激活是多种信号通路的中心，参与到细胞的分裂、分化、凋亡等多种生命过程，且在一些骨关节组织炎症，癌细胞转移等病症中发挥关键性作用。MAPK信号转导是以3 级激酶级联激活的方式进行的，如图所示，首先M......
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各种组蛋白的体外检测及提取技术
查看详情组蛋白（histones）是真核细胞核中染色质中的强碱性蛋白质，是真核生物染色体的基本结构蛋白。组蛋白将DNA进行压缩并与DNA一起形成核小体，如果没有组蛋白，染色体DNA解开，形成散乱的很长的DNA链。组蛋白的研究具有非常重要的意义。体内组蛋白的异常会导致许多疾病，如慢性肾病等。同时有关组蛋白的修饰与机体免疫调节，自身免疫病，肿瘤，神经系统疾病，以及内分泌疾病都非常相关。组蛋白有六种类型：H1、H2A、H2B、H3、H4及古细菌组蛋白，它们富含带正电荷的碱性氨基酸，而DNA中主要带负电荷，二者相互作用，使DNA缠绕在组蛋白上......
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总蛋白定量方法简介及优缺点
查看详情蛋白质定量是生物学实验不可缺少的部分，该技术被广泛的用于多个领域和行业，包括生物学科、食品检验、临床检验、疾病诊断等。在实际应用操作过程中，对样本中蛋白质进行准确可靠的定量分析，是常用且重要的工作。尽管目前有多种总蛋白定量的方法，但是由于蛋白质种类繁多，结构复杂，分子量差异大，且功能各异，暂无理想而通用的蛋白质定量分析方法。现介绍目前常用的定量方法以及优选点，实验工作者可根据实验需要，选取合适的定量方法。蛋白定量法可分为以下两大类，化学检测法，包括福林-酚法（Lowry）、二喹啉甲酸法（BCA）、......
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一种高效无缝基因拼接技术
查看详情随着PCR技术的出现，人们逐渐的打开通往研究生命本质的大门，这也使PCR技术成为了上个世纪最为伟大的技术之一。通过PCR技术能在体外迅速、大量、灵敏地扩增出目的基因片段，但是需要灵活的改造基因，只有目的基因片段是远远不够的，还需要一种高效的基因加工手段——基因拼接技术。在实验操作过程中，无论出于基因改造、载体改造以及将来会出现的物种改造等多种涉及DNA操作的实验，都不可避免会使用到基因拼接技术。 1989年Horton等人提出了SOE法（Gene splicing by over lap extension）即通过复制时DNA链的交错延伸来实现基因拼接；......
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活化的caspase 3的检测
查看详情Caspase (Cysteine aspartic acid specific protease，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶) 是近年发现的一组存在于细胞质中，活化位点均含有半胱氨酸，且特异性断开天冬氨酸残基后肽键的蛋白酶。Caspase在细胞程序性死亡（又称凋亡，apoptosis）中起重要作用。迄今为止，已经发现的人的caspase家族成员已达12种。Caspase 3 是caspase家族的一个重要成员，其在细胞凋亡过程中作为最主要的终末剪切酶行使作用。该蛋白由pro-caspase 3 酶原经过进一步的加工而形成，pro-caspase 3 是一个含有277个氨基酸残基的前体蛋白，对其结构进行分析，可以分......
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IN-FUSION一种高效无酶连接技术
查看详情在传统的分子克隆中，我们经常通过PCR技术扩增得到目的基因后，先构建T-A克隆载体，将基因在大肠杆菌中进行扩增，然后酶切阳性T-A载体和目标载体，最后进行目的基因和目的载体的连接。这个过程大概需要1-2周来完成，而且具有很大的局限性，主要表现在：1、载体多克隆位点和基因内部酶切位点的局限性；2、基因克隆过程中需要添加酶切位点，可能会带入非特异性扩增；3、对于长片段与目标载体的连接效果差；4、无法实现大规模载体的构建。IN-FUSION技术主要来源于INFUSION酶的发现，（如图）INFUSION酶能够识别线性化的DNA片段5’......