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单克隆抗体大规模制备技术
查看详情抗体制备技术大体经历3个发展阶段。第一阶段：利用高等脊椎动物制备抗血清即多克隆抗体制备技术；第二阶段：借助小鼠骨髓瘤细胞的发现以及细胞融合技术的发展建立起来的小鼠单抗制备技术；第三个阶段：随着基因测序以及基因文库筛选技术发展起来的重组抗体制备技术。第一阶段的多克隆制备技术通常不具有大规模制备抗体的潜力，而且制备的抗体组成成分复杂，实用性较差。第二阶段的单克隆抗体制备技术实质上是融合细胞株构建和发酵工程的综合应用，将抗体的制备从生物体内移动到发酵罐中，为抗体的大规模制备提供了基础。第三阶段的......
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鸡能生“金蛋”吗？云克隆有好办法！
查看详情鸡可以生“金蛋”吗？似乎鸡生金蛋只出现在童话故事中。而云克隆新研发的鸡抗制备技术，让母鸡“生”出比黄金贵得多的“抗体”蛋。抗体，作为生命科学研究中最常用的“示踪剂”，通常市价是黄金的100-1000倍。1克黄金的价格在300元左右，而0.1克抗体的售价为1000到2000元左右。一只“抗体”蛋蛋黄中含有大约0.3g抗体。这就是云克隆的生“金蛋”鸡。抗体的制备最常用的动物是兔，但是兔与人、大鼠、小鼠等物种均属于哺乳类动物，虽然大部分的蛋白差异是较大的，但是总有一些如“管家基因”编码的蛋白在各种哺乳动物中是极相似的，这些蛋白，由于结......
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慢病毒和腺病毒表达系统
查看详情借助于病毒颗粒作为基因的载体，利用病毒的侵染特性，自发的侵染哺乳动物细胞，将目的基因导入哺乳动物细胞中，以完成目的产物的超量表达或干涉。该技术目前在基因、小RNA、转录因子等功能验证领域以及重组蛋白表达、转基因哺乳动物制备等领域作为一种主要的技术手段被广泛使用。该技术体系主要由病毒包装和病毒侵染筛选两个部分组成（如图所示）。病毒包装就是借助基因工程的方法将目的基因片段与人为改造病毒的基因组通过特殊的位点连接起来形成重组病毒基因组以及重组病毒制备的过程，常规使用的病毒包装系统有慢病毒包装系统和......
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蛋白/抗体的常用标记方法介绍
查看详情为研究蛋白的性质、含量、结构与功能，以及为了方便对抗原抗体特异性结合的实验现象进行观察和检测，通常会选择利用一些易测定又具有高度敏感性的物质作为标记物标记抗原，然后通过检测这些标记物的增强放大效应而产生的颜色变化、光谱变化等来达到研究目的。即利用抗原中氨基酸残基的特殊理化性质，在特定的条件下使蛋白/抗体与标记物结合，形成蛋白/抗体标记物。标记抗原原理示意图如下：标记蛋白一般可采用酶标记、生物素标记、荧光标记以及C13和N15全蛋白标记等方式。标记抗体一般可采用酶标记、生物素标记、荧光标记以及胶体金......
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荧光抗体染料大集合
查看详情染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色，然后进行观察。随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展，许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛，并逐步显示出明显的优越性。下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类：1. 荧光素类染料，包括异硫氰酸荧光素(FITC)、 羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TE......
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昆虫细胞表达系统
查看详情昆虫细胞表达系统是四大表达系统（昆虫细胞、细菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统）之一。昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体（Bacmid）上，通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。杆状病毒是一类闭合环状双链病毒，病毒粒子呈杆状，以昆虫为主要宿主。杆状病毒还是一种出芽型分泌性病毒粒子，在感染细胞后能迅速在培养细胞中水平传播而保持细胞在相......
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小分子半抗原之载体偶联II
查看详情在上期专题中我们讲到小分子半抗原的结构修饰，这期我们将展开讲述载体蛋白的选择以及偶联方法。载体蛋白是一种自身就能引发免疫反应的大分子，许多不同种类的载体蛋白与小分子偶联后可制备成完全的抗原。常用的载体包括牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、牛甲状腺球蛋白等。对于载体蛋白的选择，主要涉及其溶解性、大小、偶联基团、免疫原性、成本价格等因素。目前市面上应用最为广泛的是牛血清白蛋白BSA(三维结构如图1)，主要是由于BSA化学性质稳定，不易变性，分子内含有多种氨基，且赖氨酸含量高，廉价易得。但BSA由于在一......
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小分子半抗原之结构修饰
查看详情要制备小分子半抗原的抗体，首先对小分子的结构有一定的要求，需要一定的复杂性或刚性，如含有苯环、杂环基团或者有分支结构，否则难以产生抗体或产生的抗体效价也较低。一些小分子半抗原若具有活性基团，如-COOH、-NH2、-OH等，可以直接跟载体蛋白进行偶联，制备完全的人工抗原（如偶联原理图1）。如果半抗原没有可直接与载体共价连接的基团，或虽有活性基团但这些基团对维系半抗原的免疫特性和特征结构十分重要，或直接与载体蛋白连接后半抗原的特征结构易受载体的局部微化学环境或空间位阻的干扰影响机体的免疫反应，则必须要对......