• 铁调素(Hepc)活性蛋白

    铁调素(Hepcidin,Hepc)是铁代谢的调节因子。Hepcidin通过与位于肠道肠上皮细胞基底外侧表面和网状内皮细胞(巨噬细胞)质膜上的膜铁转运蛋白(ferroportin,FPN)结合来抑制铁离子的转运。Hepc最终分解溶酶体中的转运蛋白,抑制FPN而阻止铁离子的输出,铁离子被隔离在细胞中。实验目的FPN已被鉴定为Hepc的相互作用因子,因此采用结合ELISA法检测重组人Hepc与重组人FPN的相互作用。实验步骤:用含有0.01%BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀释Hepc。将100uL样本移入FPN蛋白预包被的酶标板中,37℃反应2小时。弃去孔内液体,用PBST洗板3次。加......

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  • 活性蛋白单核细胞趋化蛋白1的趋化作用

    单核细胞趋化蛋白1(Active Monocyte Chemotactic Protein 1,MCP-1),也称为CCL2,属于趋化细胞因子家族。MCP-1已被证明能够诱导THP-1细胞的趋化性迁移。因此,本实验采用趋化性试验检测其MCP-1蛋白对THP-1细胞的趋化作用。将100uL THP-1细胞悬液接种于培养小室上室,不同浓度的MCP-1蛋白(25 ng/mL和50 ng/mL)置于培养小室下室,37℃孵育3h,去除滤膜并在倒置显微镜下观察并计数细胞迁移数。显微镜下观察迁移的THP-1细胞如下图:图1. MCP-1对THP-1细胞的趋化作用A.50ng/mL MCP-1蛋白对THP-1细胞的趋化作用;B.25ng/mL MCP-1蛋白......

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  • 活性蛋白巨噬细胞炎性蛋白1β的促趋化作用

    巨噬细胞炎性蛋白1β(Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta, MIP-1β),又称CCL4,主要与CCR5受体特异性结合的趋化因子,能特异性趋化淋巴细胞、单核细胞向炎症部位迁移。本实验通过检测MIP-1β对人急性T细胞白血病细胞系Jurkat的趋化作用来评估人重组MIP-1β蛋白的活性。实验方案:将100uLJurkat细胞悬液(5×105cells/mL in RPMI 1640 with FBSfree)铺板与培养小室上室,不同浓度的人重组MIP-1β蛋白(0.0001ng/mL, 0.001ng/mL, 0.1ng/mL, 1ng/mL, 10ng/mL, 100ng/mL diluted separately in serum free RPMI 1640)置于培养小室下......

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  • 活性蛋白IL2的促细胞增殖作用

    白介素2(IL2)的产生主要由T细胞受抗原或丝裂原刺激后合成,IL2在调节T细胞和B细胞的增殖中发挥着至关重要的作用。人IL2和小鼠IL2氨基酸序列的同源性是56%,提示其可能存在交叉性。因此,为了检测人重组蛋白IL2的生物学活性,我们选用小鼠CTLL-2细胞来进行细胞的增殖实验。实验方案:将CTLL-2细胞以5000个细胞每孔的细胞密度接种到96孔板中,并添加不同浓度的人重组IL2蛋白。孵育48h后,用倒置显微镜观察细胞,用CCK-8细胞计数试剂盒(cell Counting Kit-8)检测细胞增殖情况。实验结果: ......

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  • 浅谈大鼠心肌细胞原代细胞的制备

    心肌细胞培养作为一种体外研究模型,可以更便捷的从细胞和分子水平对其生长、发育、生理、代谢、病理等进行研究。在许多研究领域原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型,被广泛应用于心血管研究之中。武汉云克隆动物有限公司凭借多年的实践经验总结了一些大鼠心肌原代细胞的处理方法,给大家分享:1 大鼠的选择新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力。因此,大鼠出生时间越短,其心肌细胞分离后成活率越高,越容易贴壁生长。大量观测表明......

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  • 基质金属蛋白酶13活性实验

    基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase)是一组具有多种共同生化性质的可以降解细胞外基质的酶,它们参与正常生命过程中结缔组织的再造。基质金属蛋白酶的降解作用在中性pH条件进行,需要有内在的Zn2+离子和外在的Ca2+离子存在;且酶活能被螯合剂和金属蛋白酶的组织抑制因子(Tissue Inhinbitor of Metalloproteinase,TIMP)所抑制。 基质金属蛋白酶13(MMP13)是基质金属蛋白酶家族的成员,研究表明MMP13参与与骨关节炎相关的聚集蛋白聚糖降解,骨关节炎软骨移植物中II型胶原蛋白的裂解,以及肿瘤的进展和转移。另外,MMP1......

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  • 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)与巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSF-R)的结合活性检测

    巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),也称为CSF-1,是一种分泌型细胞因子,它可以影响造血干细胞分化为巨噬细胞或其他相关细胞。 M-CSF是造血生长因子,参与单核细胞,巨噬细胞和骨髓祖细胞的增殖,分化和存活。它还通过吞噬和趋化活性影响巨噬细胞和单核细胞,并增加了肿瘤细胞的细胞毒性。M-CSF的作用不仅限于单核细胞/巨噬细胞,通过与膜受体相互作用(C-fms编码的CSF1R或M-CSF-R原癌基因),M-CSF还可以调节早期造血细胞的增殖,并影响多种免疫、新陈代谢、生育能力和怀孕相关的生理过程。此外,巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSF-R......

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  • 骨桥素活性蛋白诱导促炎趋化因子MCP-1的高表达

    骨桥素(Osteopontin,OPN),是一种多功能磷酸化糖蛋白,在中性粒细胞的募集中发挥有重要的作用,并可诱导促炎趋化因子的表达,如:MCP-1,MIP-1β。据报道,在乳腺癌细胞系MCF-7中,OPN可通过NF-kappa B信号通路诱导MCP-1的高表达。实验目的:观察在MCF-7细胞系中,OPN蛋白是否能诱导MCP-1高表达来验证OPN蛋白的活性。实验步骤:1.将MCF-7细胞以细胞密度1x105/ml过夜培养;2.分别以100ng/ml,200ng/ml的OPN蛋白与MCF-7细胞共培养24h;3.ELISA检测细胞上清中MCP-1的含量。实验结果:实验结论:克隆OPN活性蛋白可诱导MCF-7细胞上清中......

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