• 免疫组织化学——样本处理方法

    免疫组织化学用于观察标本的染色结果对靶抗原抗体进行鉴定和定位,其标本制备非常重要。在制作标本过程中,需保持抗原的完整性,在染色、洗涤包埋等过程中避免发生溶解和变性,同时防止扩散至邻近细胞或组织间隙中。组织材料的处理是获得良好免疫组织化学结果的前提,活体组织,各种体液及穿刺液和细胞都可以用于免疫组化分析,针对不同的标本类型可以选择不同的制备方法。活体组织常选用石蜡切片和冰冻切片处理,而体液、穿刺液及细胞样本则选用涂片方式处理。对于细菌菌落或尸体病变组织,可将新鲜切面压印于玻片上做成印片。我们......

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  • 免疫荧光实验操作流程

    1.烘片:60℃烘片0.5-2小时。2.脱蜡水化:烘片结束后,石蜡切片依次置于以下试剂中:1)二甲苯I:30 min2)二甲苯II:30 min3)100%乙醇:10 min4)95%乙醇:10 min5)80%乙醇:10 min6)70%乙醇:10 min7)自来水冲洗10 min3.抗原修复-微波炉抗原热修复法(可选):将组织切片转移到沸腾的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加热1min,停止加热并静置于微波炉中10min。然后再低火加热3-4min,停止加热,使EDTA-Tris 溶液在室温自然冷却。4.PBST漂洗3次:去除残留并浸泡在PBST中,在摇床中以40 RPM漂洗5 min,重复3次。5.阻断内源过......

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  • IHC全扫图配套软件以及使用说明

    1)双击看图软件“CaseViewer_2.1__RTM_v2.1.2.69595”,按照提示进行安装;2)安装结束后会出现三个快捷方式,均要保留(不能删除);3)双击绿色图标"CaseViewer"快捷方式,出现一个界面,然后点击“Local computer”;4)找到“computer”通过路径找到目标切片,双击即可看见图片,通过滚动鼠标中间的滑轮来调整图片放大倍数,然后点击即可截取屏幕所显示的图片。

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  • 酶联免疫吸附测定实验(ELISA)-特殊样本处理方法

    酶联免疫吸附测定实验(ELISA)-特殊样本处理方法之前的专题中我们给大家介绍了常规样本诸如血清,血浆,组织细胞等的处理方法。这一次我们再跟大家普及一些在ELISA检测中碰到特殊样本的处理方式。v痰液选择痰液中较为粘稠部分称重,加两倍于痰量的0.1%DTT(二硫苏糖醇)37摄氏度恒温水浴振荡5分钟,再加入两倍于痰量的PBS缓冲液继续振荡15-20分钟,150目的金属丝网过滤,1,000×g离心10分钟吸取上清液-20oC或-80oC冷冻保存。v肺泡灌洗液1,000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC或-80oC保存,但应避免反复......

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  • 蛋白活性实验-人白介素6(IL6)

    活性人白介素6(IL6)白细胞介素6 (IL-6)是一种白细胞介素,它既是一种促炎细胞因子,又是一种抗炎的肌氨酸。目前的数据表明IL-6可通过Jak / Stat3通路直接应用于雌激素受体阳性的乳腺癌细胞增殖抑制实验。活性实验:本实验旨在检测IL-6对雌激素受体阳性MCF-7细胞的增殖具有抑制作用。细胞接种于96孔板,密度5000细胞/孔,重复3孔,过夜,然后用无血清DMEM中替换培养基中丰富的IL-6。孵育96h后,通过倒置显微镜观察细胞,细胞计数由CCK-8试剂盒测定。简要来说就是,每孔加入10µl CCK-8溶液,然后37°C孵育1 - 4小时,取上清进行450 nm处......

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  • 免疫细胞化学染色实验操作流程

    1.固定:去除残留液体,用1X PBST清洗接种在干净玻片上的细胞3次,每次3min。在室温下用新鲜配制的4%多聚甲醛固定15min。2.1XPBST漂洗三次:去除固定液,1XPBST漂洗3次,每次5min。3.透化:在1XPBST中加0.1% Triton X-100,孵育20分钟以提高通透性。4.1XPBST漂洗三次:去除残留液体,1XPBST漂洗3次,每次5min。5.封闭:去除残留液体,在切片上加5% BSA或血清。确保血清与二抗来源于相同物种。然后在室温下孵育20min。6.孵育一抗:去除残留液体,用适当稀释比例的一抗覆盖组织部位,4oC过夜孵育。7.复温:将切片从4oC移至室温静置约2......

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  • 蛋白活性实验-细胞迁移侵袭实验

    细胞transwell 迁移侵袭实验方案一、实验目的:主要用于趋化因子家族或者某些补体以及某些具有趋化活性的蛋白活性检测。二、实验仪器:倒置显微镜酶标仪 超净工作台 CO2培养箱三、相关试剂、耗材:24孔transwell小室 胎牛血清 DMEM/1640培养基 结晶紫 基质胶 四、实验步骤:A. 细胞迁移1 . 将细胞消化,终止后离心弃去培养液,用 PBS 洗 1-2 遍,用无血清培养基重悬。调整细胞密度至 1~5×105左右,每孔100-200μl加入小室上室中。2.下室加入用无血清培养基按5-10倍梯度稀释的待检测蛋白,每孔500μl。对于贴壁细胞,下室可加入含1-2% ......

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  • 蛋白质印迹(Western Blot)实验操作流程

    1.制胶1)试剂浓缩胶缓冲液:1M Tris-HCl, pH 6.8, 0.4% SDS分离胶缓冲液:1.5M Tris-HCl, pH 8.8, 0.4% SDS丙烯酰胺储存液:29%丙烯酰胺+1.0%亚甲双丙烯酰胺10%过硫酸铵TEMED(N,N,N‘,N’-四亚甲基乙二胺)电泳缓冲液:0.025M Tris Base, 0.192M Glycine, 0.1% SDS考马斯亮蓝凝胶染色液:0.2%考马斯亮蓝R-250,30%甲醇,10%乙酸考马斯亮蓝凝胶脱色液:30%甲醇,10%乙酸2)设备微型凝胶装置:Bio-Rad Mini-Protean 3 Dodeca Cell电源:Bio-Rad PowerPac HC梯度凝胶仪:Bio-Rad Model 485 Gradient Former3)实验操作在烧杯中按如下......

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